牛黄解毒片的质量检测方案设计一、设计背景牛黄解毒片为经典的传统复方，其主要功效为清热解毒，主治火热内盛引起的口腔溃疡、目赤肿痛、咽喉肿痛等症，在临床上有良好的疗效。其应用广泛，价格便宜，人们往往将其作为一种家庭常备中药。2020年颁布的《中国药典》中牛黄解毒片由八味中药组合而成，分别为人工牛黄、黄芩、大黄、桔梗、石膏、冰片、甘草、雄黄。原标准的含量测定项仅对黄芩中黄芩苷的含量进行了测定，而没有对方中用量最大的大黄进行含量测定。大黄素是大黄的主要活性成分，具有良好的抗微生物、抗炎、抗肿瘤活性和免疫抑制等作用，与牛黄解毒片的功效主治接近。所以为了测定牛黄解毒片中的大黄素含量，建立了高效液相色谱的分析方法。图1大黄素的分子结构式二、设计依据参照《中国药典》收载的大黄药材中大黄素的含量测定方法，来确定牛黄解毒片中大黄素含量测定的色谱条件和供试品制备方法。色谱采用HP1100型系列高效液相色谱仪，色谱柱为HYPERSODS2型色谱柱。检测波长为289nm。三、设计方案（一）仪器与材料1.仪器水浴锅、电子天平、超声机、高效液相色谱仪（岛津）、25ml容量瓶、1ml刻度吸管、加热回流装置、研钵。2.材料大黄素对照品(中国食品药品检定研究院)，牛黄解毒片（自制）、甲醇为色谱纯、0.1%甲酸、0.1%磷酸、三氯甲烷为分析纯。（二）测定方法1.流动相的选择根据文献的报道，尝试甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）与甲醇-0.1%甲酸(85∶15)分别为流动相。经实验确定流动相的优劣，以出峰的保留时间和峰形，确保大黄素与相邻峰可以完全分离，以此为标准确定最终的流动相组成。2.检测波长的选择根据文献的报道，选择289nm作为检测波长。3.对照品溶液的配制精密称取10mg大黄素对照品，25ml容量瓶中用甲醇定容，摇匀。再精密移取1ml该溶液，转移至25ml容量瓶中再次定容，摇匀。4.供试品溶液的配制取牛黄解毒片20片，精密称定，记录总重。倒入研钵中研磨到细粉状，精密称取粉末约0.5g，置具塞瓶中，加入甲醇25ml，加热回流30分钟，放冷至室温，滤过，滤液置25ml容量瓶中，用少量甲醇洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中。量取滤液5.0ml，置磁蒸发皿中挥去溶剂，加三氯甲烷，加热回流，放冷至室温，分液。减压回收溶剂。最后加甲醇至10ml刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。5.自制牛黄解毒片人工牛黄、黄芩各20g，大黄160g，桔梗、石膏、冰片各20g，甘草、雄黄。各20g以上药品，择净晾干，加水煎煮3次，过滤。3液合并放冷，搅匀，灌装，蒸干，密封，消毒，即得。6.阴性供试品溶液的配制取缺大黄的其他药材，按自制牛黄解毒片工艺及4.供试品溶液的制备方法制成缺大黄的阴性供试品溶液。7.阴性干扰实验精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪测定结果应使大黄素相应保留时间处无干扰峰。8.色谱条件的确定与专属性实验色谱柱：HYPERSODS2。柱温：25℃。进样室温度：室温；进样体积：20μl。记录大黄素的保留时间和峰形，计算分离度，判定是否可以达到良好的分离效果。表1专属性实验结果物质名称保留时间（min）分离度大黄素大黄酚大黄酸9.线性关系的确定分别精密称取大黄素的对照品溶液0.5，0.25，0.1，0.05，0.025ml，用稀释液定容至10ml的容量瓶之中，取适量摇匀，微孔滤膜过滤，分别进样20微升，以各对照品溶液的浓度（mg/ml）为横坐标，以对照品峰面积为纵坐标，绘制大黄素的标准曲线。将大黄素的回归方程、相关系数、和线性范围列至表2。同时在信噪比（S/N）为10和3时的浓度为定量限和检出限。表2大黄素的回归方程，相关系数和线性范围组分回归方程相关系数r线性范围定量限LOQ检出限LOD大黄素10.精密度，重复性和稳定性实验精密度实验：取浓度为0.01mg/ml的大黄素的对照品溶液，进样20微升，重复实验6次，分别记录峰面积以及保留时间。验证保留时间的稳定以及测试的精密度，并计算相对标准偏差（RDS）。相对标准偏差较小则表明了仪器的精密度良好。精密度试验记录见表3。表3精密度试验记录编号峰面积保留时间123456平均值相对标准偏差（RDS）重复性实验：取牛黄解毒片供试品溶液6份，在上述色谱条件下进样20微升，记录峰面积，计算RDS，相对标准偏差小则表明方法的重复性较好。重复性试验记录见表4.表4重复性试验记录编号峰面积平均值相对标准偏差（RDS）123456稳定性实验：取牛黄解毒片供试品溶液，室温放置0，4，