时间分辨荧光免疫技术问题时间分辨荧光免疫（TrFIA）（Time-ResoledFluoroimmunoassay）定义发展历程厂家标记物为具有独特荧光特性的稀土金属---镧系元素时间分辨通过时间延迟，将特异性荧光与非特异性荧光分辨开来，使本底达到0Stokes位移利用镧系元素光谱特点，将发射荧光与激发荧光分辨开来，零本底的又一保障稀土离子激发光、发射光和Stokes位移解离增强技术时间分辨荧光免疫的原理时间分辨荧光免疫原理图（Time-resolvedFluorescenceImmunoassay）乙肝“两对半”TRFIA定量检测原理示意图乙肝表面抗原免疫反应图（时间分辨荧光法）乙肝表面抗体免疫反应图（时间分辨荧光法）乙肝ｅ抗原免疫反应图（时间分辨荧光法）乙肝ｅ抗体免疫反应图（时间分辨荧光法）乙肝核心抗体免疫反应图（时间分辨荧光法）时间分辨荧光免疫的试剂种类时间分辨荧光免疫分析与其它免疫学方法的比较标记免疫学发展历程放射性免疫分析法（RIA）---标记物：125I酶免疫分析法（ELISA）---标记物：HRP(辣根过氧化物酶）化学发光免疫分析法（CLIA）---标记物：化学发光物质（鲁米诺）电化学发光免疫分析（ECL）---标记物：三联吡啶钌TRFIA在乙肝“两对半”定量检测应用一、提高了检测的灵敏度时间分辨荧光法（TRFIA）检测HBsAg灵敏度可达到0.2ng/ml，而酶免法（ELISA）检测HBsAg灵敏度是2ng/ml。缩短了急性乙肝检测的“窗口期”（1）定量分析HBsAg和HBsAb浓度的变化，可以预见急性乙肝是否处于恢复期如HBsAg浓度降低，HBsAb逐渐升高，说明病情正向恢复期发展反之。反之，HBsAg浓度处于高水平或上升，而HBsAb处于低水平，则容易发展为慢性乙肝或携带者。（3）HBcAb浓度的高低可以反映病毒感染的状态1、乙肝急性感染常为高滴度的HBcAb，恢复期浓度下降，慢性乙肝HBcAb呈持续高浓度。2、低浓度的HBcAb一般为恢复期或既往感染。三、乙肝疫苗接种HBsAb是一种真正意义的保护性抗体，其定量的检测可以对其具有的免疫力做出正确的评价，对乙肝的预防起到监督作用。四、HBV血清学标志物与HBV-DNA的关系血清学标志物反映机体对病毒的免疫状态，病程，判断病情，不能完全反映病毒在体内的复制状况HBV-DNA1、真实反映病毒在体内复制水平，观察药物疗效2、部分“小三阳”及低水平病毒复制时出现阴性3、不能反映机体的免疫状态和病情血清HBV-DNA荧光定量PCR测定可以直接反映病毒的数量，病毒的复制情况，具有很多临床应用价值，但不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒的状态时间分辨法检测“乙肝两对半”的意义NCU/ml单位来源半自动ANYTEST2000谢谢！