第四章酶的分离纯化第四章酶的分离纯化及产品成型一、生物下游加工技术二、分离纯化的一般流程发酵液发酵液第一节酶的提取分离（酶溶液的制备）发酵液二、细胞破碎—只对胞内酶利用机械力的搅拌，剪切或研碎细胞。组织捣碎机，细胞研磨器，匀浆器等。高压匀浆器珠磨机通过温度，压力，声波等各种物理因素的作用，将组织细胞破碎的方法。冻融法、压差法、超声波法。通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎的方法。有机溶剂：如甲苯，丙酮，丁醇，氯仿等。非离子型表面活性剂：吐温、催通等。微生物种类机械破碎三、酶的提取（一）提取方法（二）提取过程中的注意事项第二节酶的沉淀分离、离心和膜过滤技术（一）盐析沉淀法1、盐析操作（2）调整盐浓度的方法加固体（NH4）2SO4：①加入饱和硫酸铵溶液2、为了得到较好的盐析效果，应控制下列因素：（二）有机溶剂沉淀法（三）等电点沉淀（四）选择性变性沉淀法第二节酶的沉淀分离、离心和膜过滤技术第二次作业：二、膜过滤技术在酶分离纯化中的应用借助于一定孔径的半透膜，将不同大小、不同形状和不同特性的物质颗粒或分子进行分离的技术。膜分离技术的地位和影响（一）膜分离的类型2、按膜孔径或截留物质的大小：灰尘各种膜分离法的原理和应用范围1、微滤(MF)2、超滤(UF)纳滤膜主要用于截留粒径在2～10nm，分子量为1000左右的物质，可以使盐和小分子物质透过，操作压（0.5～1MPa）。4、反渗透(RO)5、电渗析1、若除去酶溶液中的盐分，可采用下面哪种分离方式？（）A.板框过滤B.微滤C.超滤D.反渗透2、若除去酶溶液中的生物小分子，可采用下面哪种分离方式？（）A.板框过滤B、微滤C.超滤D.反渗透3、在采用微生物发酵生产壳聚糖酶时，若采用膜过滤的方法除去发酵液中的菌体细胞，可采用哪种膜分离方式？用生产所得的壳聚糖酶来降解壳聚糖生产壳寡糖时，反应完成后，可采用哪种膜分离方法除去反应液中的壳聚糖酶？三、膜分离技术的基本流程中空纤维超滤器中空纤维膜分离装置是将成束的中空纤维装入一筒内，两端封闭。每根中空纤维内腔直径为0.2mm。中空纤维超滤膜组件清洗液主要有：陶瓷、微孔玻璃、不锈钢和碳素等。适用：微滤膜。特点：是机械强度高，耐高温、耐化学试剂和耐有机溶剂，但缺点是不易加工，造价较高。（1）透水率（透水通量、流率）：是指在一定温度和压力条件下单位膜面积在单位时间内透过的水量。处理蛋白质（酶）溶液时，透水率常为纯水的10%。