PAGE-4-http://www.jiandan100.cn第页简单学习网课程讲义学科：生物专题：专题现代生物技术专题（下）主讲教师：林祖荣北京师范大学附属实验中学生物特级教师HYPERLINK"http://www.jiandan100.cn/"http://www.jiandan100.cn北京市海淀区上地东路1号盈创动力大厦E座702B免费咨询电话4008-110-818总机：010-58858883现有甲、乙两种可能有一定毒性的化学物质，实验室研究人员欲通过动物细胞培养的方法来鉴定它们是否有毒性并比较二者毒性的强弱。请你以一个研究人员的身份参与此项研究，完成下列有关问题。金题精讲题一现有甲、乙两种可能有一定毒性的化学物质，实验室研究人员欲通过动物细胞培养的方法来鉴定它们是否有毒性并比较二者毒性的强弱。请你以一个研究人员的身份参与此项研究，完成下列有关问题。⑴实验原理：__________________________________________________。根据这种变异细胞占全部培养细胞的百分数（以下称Q值），可判断该化学物质的毒性。⑵材料用具：活的小白鼠胚胎、胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、适宜浓度的化学物质甲溶液、适宜浓度的化学物质乙溶液、蒸馏水、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、恒温箱、载玻片、盖玻片、显微镜、小白鼠正常有丝分裂各时期的高倍显微照片。⑶实验步骤：Ⅰ、制备细胞悬浮液。把活的小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎，转入锥形瓶中，加入处理，使胚胎组织离散成单个细胞，再加入，制成细胞悬浮液。Ⅱ、进行细胞培养。①取A、B、C3个洁净的培养瓶，___________________________________；②向A、B两个培养瓶中分别加入等量的甲、乙溶液，C瓶中加入等量的蒸馏水，摇匀③把3个培养瓶放在中，设定在37℃或适宜温度条件下培养。Ⅲ、制作临时装片。①当细胞增殖到大约8代左右时，同时从恒温箱中取出3个培养瓶，用胰蛋白酶液处理，加入动物细胞固定液，迅速杀死细胞并固定细胞分裂相；②静置一段时间后，分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬浮液，滴在与培养瓶有相同编号的载玻片的中央，__________________，3—5min后，盖上盖玻片。Ⅳ、镜检和统计。把临时装片放在显微镜下，先用低倍镜后用高倍镜，寻找处于______________期的细胞，并与_______________进行对比，统计并计算该期变异的细胞占该期细胞总数的百分数（Q值）。⑷结果分析与结论：①经研究人员实验得知，A、B、C三个培养瓶的Q值依次为：QA=1.3%,QB=12.5%,QC=0.1%,由此可知该实验的结论是_____________________________。②在实验中，C培养瓶起__________作用，C瓶的Q值说明______。题二已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：（1）试管中除融合的杂种细胞外，还有种融合细胞（不考虑多细胞融合）。（2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并说原理。方法：。原理：。细胞株人染色体编号12345678A株＋＋＋＋－－－－B株＋＋－－＋＋－－C株＋－＋－＋－＋－（3）将分离出的杂种细胞在不同条件下继续培养，获得A、B、C三细胞株。各细胞株内含有的人染色体如右表（“＋”有，“—”无），测定各细胞株中人体所具有的五种酶的活性。结果是：①B株有a酶活性；②A、B、C株均有b酶活性；③A、B株有c酶活性；④C株有d酶活性；⑤A、B、C株均无e酶活性。若人基因的作用不受鼠基因影响，则支配a、b、c、d和e酶合成的基因依次位于人的染色体上。讲义参考答案金题精讲题一答案：（1）实验原理：有毒物质会使动物细胞发生染色体变异（3）实验步骤：Ⅰ、胰蛋白酶动物细胞培养液Ⅱ、①分别放入等量的细胞悬浮液恒温箱Ⅲ、②加1—2滴龙胆紫液染色Ⅳ、有丝分裂中小白鼠正常细胞有丝分裂中期高倍显微照片（4）①甲、乙两种化学物质均有毒性，且乙的毒性比甲的毒性大②对照动物细胞在正常培养状态下染色体变异频率非常低题二答案：（1）2（2）方法：培养液中加入氨基喋呤，收集增殖的细胞原理：加入氨基喋呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓