酶工程动植物细胞培养产酶资料(zīliào)一、植物(zhíwù)细胞培养产酶全世界用其制备天然芳香化合物的价值超过15亿＄/年；美国用其生产药物超过30亿＄/年；我国使用的中草药及其制备大部分来自植物；主要(zhǔyào)生产色素、药物、香精、酶等次级代谢物。酶在细胞膜外，由纤维素构成。功能：1.支持(zhīchí)细胞，使它有固定形状。2.保护细胞1.植物(zhíwù)细胞培养植物细胞(xìbāo)具有的特性二、植物(zhíwù)细胞培养的特点（2）缩短周期发酵周期10～30天，种植周期几个月～几年。（3）易于管理减低劳动强度；不受地理环境和气候条件等影响。（4）提高产品质量主要产物浓度高，易于分离纯化(chúnhuà)，减少环境中各种有害物质污染和侵蚀。（5）其它设计植物细胞生物反应器和控制工艺条件时应注意一些问题。三、植物(zhíwù)细胞培养的工艺条件及其控制1、外植体的选择(xuǎnzé)与处理2、植物细胞(xìbāo)的获取酶解法酶对细胞壁有一定的软化作用，所以采用酶法时，必须(bìxū)加入甘露醇等渗透压保护剂。优点可获得较多的叶肉游离细胞（但对禾本科植物叶片效果不好）。2、植物细胞(xìbāo)的获取愈伤组织：将上述(shàngshù)外植体植入诱导培养基中，于25℃左右培养一段时间，从外植体的切口部位长出小细胞团。1、植物细胞培养基的特点（1）需要大量无机盐，除P、S、K、Ca、Mg外，还需B、Mn、Zn、Mo、Cu、Co、I（2）需要多种维生素和植物生长激素，如硫胺素、吡哆素、烟酸(yānsuān)、肌醇、分裂素等。（3）一般为无机氮源。（4）一般以蔗糖为碳源。2.几种(jǐzhǒnꞬ)常用的植物细胞培养基几种(jǐzhǒnꞬ)常见的培养基是：MS、B5、White等。3、植物细胞(xìbāo)培养基的配制（三）温度的控制室温（25℃）（四）pH值的控制微酸性（pH5～6）（五）溶解氧的调节控制代谢慢，耗氧少，对剪切力敏感，搅拌(jiǎobàn)不宜强烈。（六）光照的控制（七）前体的添加提高次级代谢物的产量。（八）刺激剂(electior)的应用强化次级代谢产物的生物合成。常用微生物细胞壁碎片和胞外酶。四、植物细胞培养产酶的工艺(gōngyì)过程(1)大蒜愈伤组织的诱导选取结实、饱满、无病虫害的大蒜蒜瓣，去除外皮，先用70%乙醇(yǐchún)消毒20s，再用0.1%升汞消毒10min，然后无菌水漂洗3次。在无菌条件下，切成0.5cm3的小块，植入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L6-BA的半固体MS培养基中，在25℃，600lux，12h/d光照条件下培养18d，诱导得到愈伤组织，每18天继代一次。(2)大蒜(dàsuàn)悬浮细胞培养将上述在半固体MS培养基上培养18d的愈伤组织，在无菌条件下转入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L6-BA（苄基腺嘌呤）的液体MS培养基中，加入灭菌的玻璃珠，25℃，600lux，12h/d光照条件下震荡培养18d，使愈伤组织分散成为小细胞团或单细胞。然后在无菌条件下，经过筛网将小细胞团或单细胞转入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L6-BA的液体MS培养基中，25℃,600lux，12h/d光照条件下震荡培养18d。(3)酶的分离纯化细胞(xìbāo)培养完成后，收集细胞(xìbāo)，经过细胞(xìbāo)破碎、提取、分离得到超氧化物歧化酶。二、动物(dòngwù)细胞培养产酶动物细胞可产生较高价值的物质,特别(tèbié)是激素、疫苗，单克隆抗体和酶等动物功能蛋白。动物细胞模式图一、动物细胞的特性(tèxìng)二、动物细胞培养的特点（1）主要用于生产各种功能蛋白质；（2）生长缓慢；（3）需加抗生素防污染；（4）细胞体积大，无细胞壁保护，对剪切力敏感；（5）具锚地(máodì)依赖性，宜贴壁培养；部分用悬浮培养；（6）培养基成分复杂，反应过程成本高，产品价格贵；（7）原代细胞培养50代后，即会退化死亡，需要重新分离细胞。三、动物(dòngwù)细胞培养的方式细胞悬浮(xuánfú)培养法的优点注意事项大多数动物细胞，采用:（1）滚瓶培养系统:结构(jiégòu)简单,重现性好;将动物细胞吸附于微载体表面，在培养液中进行悬浮培养，使细胞在微载体表面长成(chánꞬchénꞬ)单层的培养方法称为微载体培养法。由葡聚糖凝胶制成微球,动物细胞依附其上单层生长繁殖,悬浮于培养液中;特点:比表面积大,单位体积培养液细胞产率高;具有悬浮培养的优点。制备微载体(zàitǐ)的材料主要有：葡聚糖（DEAE—SephadexA50及A25）塑料明胶