会计学1、实验(shíyàn)目的2、实验(shíyàn)重点和难点3、实验(shíyàn)原理苯酚法：组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好地除去DNA和蛋白质。浓盐法：在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的透性，使RNA释放出来，再利用等电点（pH为2.0～2.5）沉淀。此法易掌握，产品颜色较好。盐浓度需要控制，太低，RNA不易(bùyì)从细胞中释放出来，太高，细胞急剧收缩不利于抽提。一般80～120g/L为宜。稀碱法：利用细胞壁在稀碱条件下溶解，使RNA释放出来，这种方法提取时间短，但RNA在稀碱条件下不稳定(wěndìng)，容易被碱分解；本实验采用的稀碱，既可加速细胞的破裂，又可增大RNA的溶解度。当碱被中和后，可用乙醇(或者异丙醇）将RNA沉淀，或用等电点沉淀RNA(应严格控制pH,缓慢调),此为RNA的粗品。核糖核酸含有核糖、嘌呤(piàolìng)碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。核酸（1）嘌呤碱与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化合物沉淀。（2）磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵沉淀[(NH4)3PO4·12MoO3↓],有还原剂存在(cúnzài)时，形成蓝色钼蓝。(NH4)MoO4+H2SO4H2MoO4+(NH4)2SO4H3PO4+12H2MoO4H3P(Mo3O10)4+12H2OH3P(Mo3O10)4Mo2O3•MoO3（钼蓝）还原(huányuán)产物钼蓝在波长660nm测定吸光值，当无机磷含量在1—25μg范围内，光吸收和含磷量成正比。RNA的含磷量为9.5%，即1μgRNA磷相当于10.5μgRNA。DNA的含磷量平均为9.9%。（3）地衣酚(苔黑酚）显色法：RNA与酸共热时降解，形成戊糖，继而形成糠醛（α-呋喃甲醛），糠醛与地衣酚（3，5-二羟基甲苯(jiǎběn)）反应，形成鲜绿色复合物，可用比色法测定。当核糖核酸浓度在10～100μg/ml范围内，其浓度与吸光度成线性关系需要FeCl3或Cu2+作催化剂。4、实验(shíyàn)操作(二)RNA的鉴定取沉淀约1g，加10ml10％H2SO4→沸水浴中加热30min。（5）．嘌呤碱取水解(shuǐjiě)液2mL加入2mL浓氨水，然后加入约1mL5%硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。（慢慢加入嘌呤碱时，沉淀上浮，摇匀，沉淀下沉）（6）．核糖取1支试管加入水解(shuǐjiě)液0.5mL、1mL苔黑酚三氯化铁浓盐酸溶液。放沸水浴中2分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。时间久了会有黑色沉淀，是浓度高，产物结晶出来了。5、注意事项提取RNA时必须用沸水浴，并经常搅拌，NaOH必须实现预热。用乙酸调pH5～6必须有，目的可以除去一些杂质。最后过滤前必须将乙醇(yǐchún)沥干，不能带水，否则RNA会粘在滤纸上，无法取下。也可以采用离心的方法。所得RNA粗品应是浅黄色粉末状。6、原始数据7、讨论(tǎolùn)