总RNA提取一原理:采用高效Trizol试剂快速提取组织和细胞中的总RNA。在提取过程中，高效Trizol试剂的使用，不仅能极强烈的抑制RNA酶的活性，而且能促进核蛋白复合物的解离，使RNA与蛋白质分离进入无DNA和蛋白质的溶液。这样，既可以在短时间内处理大量样品，又提高了RNA产量。二实验步骤:组织中提取总RNA1．在一个经DEPC处理过的50ml离心管中放置1g新鲜组织，加入10mlTrizol试剂，用电动匀浆器充分匀浆约1-2分钟，随后Vortex震荡混匀，冰浴10分钟。2．加入3.5ml氯仿，充分震荡或上下来回颠倒数次，稍静止后出现分层，随即于4℃,12,000rpm离心15分钟。3．将上清（水相）转移于另一支干净50ml离心管中。注意不要吸到中间层的蛋白沉淀。加入等体积的异丙醇（4℃预冷）混匀。-20℃放置一小时后，4℃，12，000rpm离心20分钟。4．沉淀即所需要的总RNA。加入2ml75%乙醇，晃荡洗涤一次并小心地倒掉乙醇。用干净的一次性塑料手套套住离心管的管口，于37℃烘箱烘干或真空抽干。然后加入200ulDEPC处理过的水溶解沉淀，储存于-20℃待用。5．或者用1mlDEPC处理过的水溶解沉淀后，分装在两个干净的1.5mlEppendorf离心管中（DEPC处理过），加入等体积的异丙醇（4℃预冷）混匀。-20℃放置保存至少一个小时后待用。使用前，12,000rpm离心20分钟，去上清，用75%乙醇晃荡洗涤一次，小心倒掉乙醇。用干净的一次性塑料手套套住离心管的管口，于37℃烘箱烘干或真空抽干。然后加入20ul-50ulDEPC处理过的水溶解沉淀，随即使用。细胞中提取总RNA：（主要的步骤同上，只是所加入的各种试剂的量有所不同）1.于一个1.5mlEppendorf离心管中放入106-108细胞,加入1mlTrizol试剂,用Vortex震荡器充分震荡混匀，冰浴5分钟。2.加入350ul氯仿,充分震荡或上下来回颠倒数次，稍静止后出现分层，随即于4℃,12,000rpm离心10分钟。3．将上清（水相）转移于另一支干净1.5mlEppendorf离心管中。注意不要吸到中间层的蛋白沉淀。加入等体积的异丙醇（4℃预冷）混匀。-20℃放置一小时后，4℃，12，000rpm离心20分钟。沉淀即所需要的总RNA.4.加入0.25ml75%乙醇，晃荡洗涤一次并小心地倒掉乙醇。用干净的一次性塑料手套套住离心管的管口，于37℃烘箱烘干或真空抽干,然后加入20ul-50ulDEPC处理过的水溶解沉淀，随即使用或储存于-20℃保存待用。三注意事项:为快速检测所提取的RNA的质量,可以用经高压灭菌过两次的双蒸水,配置1XTAE电泳缓冲液以及1%的琼脂糖凝胶.电泳槽及梳子,可用3%的过氧化氢浸泡一小时以上或用0.1%DEPC水拭擦干净待用。用以提取RNA的组织或细胞最好是新鲜的,或者冻存于液氮里.提取血液中分离的淋巴细胞RNA,请务必尽量采用新鲜的血液并立即分离淋巴细胞,避免组织和细胞中的内源性RNase对RNA的降解。提取过程中应该特别注意勤换一次性塑料手套,取样用的加样器请先用75%乙醇擦拭干净。电动匀浆器的匀浆头,需180℃-200℃高温干烤5小时以上,或0.1%DEPC水处理2小时后15磅高温消毒20分钟。为了尽可能除去所提取的总RNA中的蛋白,可以加入等体积的酚/氯仿再抽提一次。