目的与要求2.5.1Sanger双脱氧链终止法■2.5.2Maxam－Gilbert化学修饰法■2.5.3序列分析自动化■2.5.4杂交测序■2.5.5DNA策序的商业运作及存在问题■2.5.6思考问题■2.5.1Sanger双脱氧链终止法引物—延伸测序策略2.5.1.1Sanger双脱氧链终止法原理反应：同时加入引物和模板、DNA聚合酶1、一种ddNTP、以及四种dNTP（有一种带放射性标记）。变性胶电泳分离反应混合物。放射自显影术，检测单链DNA片段的放射性带。结果判读，从放射性X光底片上，直接读出DNA的核酸顺序。GTACGTTGACGCC酶、原料比例2.5.1.2Sanger双脱氧-M13体系DNA序列分析法克服缺点的一种途径—DNA分子克隆M13载体克隆DNA片段这种随机的方法，也需要通过顺序的测定将派生的序列拼连起来，恢复成原来结构形式的总DNA序列。使用M13载体系列的优点2.5.1.3Sanger双脱氧一pUC体系DNA序列分析法Sanger双脱氧一pUC体系DNA序列分析法基本步骤2.5.2Maxam－Gilbert化学修饰法2.5.2.1Maxam－Gilbert化学修饰法的原理出发材料：局部消化的DNA分子群体中纯化出特定的末端带有放射性标记的DNA片段(双链或单链）关键：4种核苷酸碱基中，有1～2种发生特异性的化学切割仅应，包括碱基的修饰、修饰的碱基从其糖环上转移出去以及在失去碱基的部位发生DNA链的断裂三个主要内容。碱基特异的化学切割反应——肼（NH2·NH2）碱基特异的化学切割反应——硫酸二甲酯［（CH3O）2SO2］2.5.2.2化学修饰法测序图解CT+CG+AA2.5.2.3Maxam－Gilbert化学修饰法优点2.5.3序列分析的自动化2.5.4DNA杂交测序杂交的检测杂交测序的应用2.5.5DNA策序的商业运作及存在问题S“测序”思考回答问题