流式细胞术测定植物基因组大小.ppt
上传人:天马****23 上传时间:2024-09-11 格式:PPT 页数:23 大小:2.7MB 金币:10 举报 版权申诉
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流式细胞术特点FACSCalibur流式细胞分析仪大型机(BD,FACSAria科研型)流式细胞仪检测范围细胞信号转导/通路分析细胞间相互作用分子共定位与胞内分子转运细胞形态学荧光原位杂交基因表达分析细胞凋亡细胞周期分析白细胞亚群分析流式细胞仪的工作原理分选系统数据显示类型二维等高图和密度图利用特殊的荧光染料(PI、EB、AO等)与细胞内DNA碱基结合,被荧光染料染色的细胞在激光照射下发射出荧光,荧光强度与DNA含量成正比。流式细胞仪通过测定细胞的荧光强度推算出细胞的DNA含量。测量DNA的绝对含量时,须设一个已知DNA含量的标准样品作对照,来换算出DNA的绝对含量。样品2CDNA含量=[(样品G0/G1峰均值)/(标准G0/G1峰均值)]×标准2CDNA含量(pgDNA)测量DNA的相对含量时,须设一已知倍性的同类材料作照,换算出待测样品的DNA相对含量,进行倍性分析。变异系数(CoefficientofVariation,CV):通常以G0/G1峰的宽度来反映,该指标反映了仪器的分辨率或精确度。影响CV的因素主要包括两方面:仪器因素(如鞘液的流速、光路、机器调试等)和样本制备(如样品中碎片含量、细胞团块、细胞活性和细胞浓度等)及染色过程对标本的人为影响。优化DNA分析条件就是指最大程度地减少这两大因素带来的变异。DNA指数(DNAindex,DI):DI指的是样本G0/G1峰的平均道数与正常二倍体G0/G1峰的平均道数之间的比值。DI为1意味着二倍体(2c)。倍体(Ploidy):原指染色体数目,流式中用来描述总的DNA含量。二倍体细胞有正常细胞的DNA含量但不除外染色体异常。DI为1.9-2.1的细胞为四倍体(CV<5%)。除二倍体和四倍体,其他均称异倍体。植物组织