生物技术制药第四章抗体制药第一阶段：用抗原免疫动物来获得多克隆抗体。1890年Behring和北里柴三郎等发现了白喉抗毒素，并建立了血清疗法，开抗体制药之先河。第二阶段：1975年Köhler和Milstein等创建杂交瘤技术，制备单克隆抗体，以及各种改进型抗体，如人-鼠嵌合抗体。第三阶段：1994年Winter以基因工程方法制备抗体为代表，并发展为抗体工程。1.抗原（antigen，Ag）：指能与淋巴细胞的抗原识别受体特异性结合，具有启动特异性免疫应答，而且能与应答产物（抗体或致敏淋巴细胞）在体内外发生特异性反应的物质。抗原决定簇/基（antigendeterminant）——抗原特异性的物质基础：抗原分子中决定抗原特异性的基本结构或化学基团。抗原分子表面的特殊化学基团，一般由5～15个氨基酸、5~7个多糖残基或核苷酸组成。2、抗体（antibody，Ab）是机体免疫系统受抗原刺激后产生的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白。抗体是免疫球蛋白，但免疫球蛋白不一定都是抗体。Ig的基本结构：由四条肽链构成的单体，即由两条相同的重链（heavychain，H链）和两条相同的轻链（lightchain，L链）组成。借链间二硫键而彼此连接在一起，形成Y字形的Ig单体分子。超变区是Ig与抗原决定簇发生特异性结合的部位，故又称为互补决定区（complementarity-determiningregion，CDR）。Heavychaing,a,m,d,ore3.人工制备抗体毒性基团单克隆和多克隆抗体的比较①用于免疫学检测，辅助临床诊断。②McAb用于亲和层析，分离微量可溶性抗原。③标记的McAb用于基础研究，了解细胞分化等。④制备生物导弹用于肿瘤、移植等的临床治疗。单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用二、细胞融合技术背景知识第二节单克隆抗体单克隆抗体和多克隆抗体的制备第二节单克隆抗体一、抗原与动物免疫一、抗原与动物免疫一、抗原与动物免疫一、抗原与动物免疫二、细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养二、细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养二、细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养二、细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养二、细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养三、筛选阳性克隆与克隆化1、精制破伤风毒素抗原（）吸附三、筛选阳性克隆与克隆化三、筛选阳性克隆与克隆化四、杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定四、杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定五、单克隆抗体的大量制备五、单克隆抗体的大量制备六、单克隆抗体的纯化六、单克隆抗体的纯化续（2）离子交换法在最适离子强度及pH条件下，以离子交换层析分离单克隆抗体可以纯化25~100倍。高容量、高流速、化学稳定的新型离子交换剂适宜单克隆抗体的大规模纯化。（3）亲和层析多用蛋白A亲和层析，适用于IgG类单克隆抗体的纯化。IgG与蛋白A的结合与pH有密切关系，鼠源性单克隆抗体在pH8.0时，IgG2b、IgG3几乎全部结合于蛋白A柱上，IgG1稍差，用pH3.5缓冲液可洗脱IgG2b，pH4.0缓冲液可洗脱下IgG3，pH4.5缓冲液可洗脱下IgG2a，pH6.0可洗脱下IgG1。用蛋白A亲和层析收获的抗体纯度很高，但也有极微量的杂蛋白。保留抗体的抗原结合能力、降低生产成本、易于大规模生产、减小鼠源性成份。一、鼠源性单克隆抗体的改造一、人-鼠嵌合抗体二、改形抗体三、小分子抗体四、双功能抗体五、抗体融合蛋白五、抗体融合蛋白第四节抗体工程二、噬菌体抗体库技术的特点三、基因工程抗体的表达第五节抗体诊断试剂二、免疫标记技术用的抗体类试剂二、免疫标记技术用的抗体类试剂二、免疫标记技术用的抗体类试剂三、导向诊断药物第六节抗体治疗药物抗原决定簇/基（antigendeterminant）——抗原特异性的物质基础：抗原分子中决定抗原特异性的基本结构或化学基团。抗原分子表面的特殊化学基团，一般由5～15个氨基酸、5~7个多糖残基或核苷酸组成。二、细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养一、人-鼠嵌合抗体第四节抗体工程三、基因工程抗体的表达第五节抗体诊断试剂二、免疫标记技术用的抗体类试剂