色谱柱分类与选择21Basicprincipleofchromatographicseparation1.1色谱分离基本原理硅胶颗粒基质合成步骤：1.合成硅胶基质2.键合配体(键合相)3.端基封尾end-capped以传统方式制造硅胶色谱填料的过程:起始原料为矿物硅酸盐（如泡花碱），即A类硅胶6填料的端基封尾–封口残余硅羟基–减少不可逆吸附或拖尾–增加碳含量（0.1%-1%）单、双、三官能团键合键合常用封尾end-capped：三甲基硅氧烷封尾空间位阻：异丙基硅氧烷，异丁基硅氧烷空间位阻极性嵌入polarembedded问题：下列色谱柱如何选择？以传统方式制造硅胶（A类硅胶）色谱填料的过程:起始原料为矿物硅酸盐（如泡花碱）既然pH<3时硅醇基离解受抑制，为何不在所有情况下采用酸性条件进行分离?硅胶晶格中杂质铝对硅醇基酸度的影响硅胶中金属杂质含量对螯合性化合物Hinokitiol峰形的影响传统型C18硅胶柱上金属杂质对碱性化合物峰形的影响如何解决碱性化合物和螯合物的峰形问题?现代色谱柱三大技术平台常见品牌C18柱在pH7下的性能比较2.6对碱性化合物的峰对称性具有极性嵌入基团的反相填料结构示意内嵌极性基团固定相：水表面层可能机理分停流速后(孔去湿:~3%)EcosilC18-EPSTfUSP=1.1注:使用相同的流动相极性基团嵌入技术（屏蔽技术）的历史沿革多种品牌色谱柱对碱性化合物的峰形比较Atlantis®dC18Column:揭开人类酿酒历史之谜(2004)AQ柱的极性保留秘诀AQ色谱柱的特点AtlantisâdC18柱对极性化合物的优异保留性能AtlantisdC18:丙毒(丙烯酰胺)分析条件色谱柱：AtlantisTMdC184.6x150mm,5µm流动相A:0.1%TFA水溶液流动相B:0.1%TFA乙腈溶液流速:1.4mL/min梯度:时间梯度组成(min)%A%B0.010005.09736.0851510.0802012.0010025.00100进样体积:10.0µL温度:30oC检测:UV@268nm仪器:AllianceTM2695,2996PDA问题HILICHILIC柱特性三聚氰胺和三聚氰酸同时检测49突破高纯硅胶柱局限性的必要性宽pH值色谱柱的几种类型高pH条件下柱稳定性的强化测试结果柱寿命比超纯硅胶柱提高十倍以上!pH对填料稳定性的影响灵敏度与选择性的改变简化方法开发过程高温寿命试验宽pH值色谱柱的优点基于杂化颗粒的XTerraRP18柱与普通C18硅胶柱在分离酸性、碱性化合物时的拖尾因子比较为何杂化颗粒柱可增强在高pH下的柱寿命？Dibucaine(局部麻醉药-碱性化合物)MinutesAltretamine(三嗪类抗癌药物-强碱性化合物)您在日常HPLC分析工作中所面临的常见问题我的色谱分离为何重现性不佳?您在日常HPLC分析工作中所面临的常见问题我的色谱柱寿命为何不长?您在日常HPLC分析工作中所面临的常见问题(如何在实践中调控‘a’?这是方法开发的根本!溶剂选择性反相色谱中选择性的调节工具色谱柱选择反相色谱中选择性的调节工具选择性与pHpH带来的保留与选择性变化方法开发的基本思路运行低pH快梯度：在选择性不同的所有色谱柱上频繁切换分析柱、流动相溶剂和缓冲液过于繁琐？自动方法开发系统（AMDSsystem）可帮您解决问题…探索性HPLC方法开发色谱条件例:利尿剂利尿剂:使用乙腈的起始梯度分离两种条件下的分离结果考察甲醇体系：最终梯度优化结果利尿剂分离pH9.0条件下的溶剂选择性：等度分离条件探索利尿剂：pH9条件下最终的等度分离条件等度分离利尿剂重要的方法开发为何要从新色谱柱开始？反相色谱柱的选择小结:(1)需要使用宽pH值或高温条件－如生物碱分离宽pH值色谱柱：pH1-12优点：pH范围宽，高温条件下填料稳定性好，色谱峰形好，寿命长采用质谱检测器:窄内径/小颗粒/短柱结语