色谱柱的维护保养24HPLC色谱柱维护保养概要:收到新的色谱柱管路和接头流动相注意事项色谱柱的保护保护柱色谱柱的清洗色谱柱的保存核实色谱柱的信息是你订购的色谱柱吗?规格是否正确?固定相是否正确?检查物理性损坏用标准测试样品在标准条件下测试柱子，以验证柱效每支菲罗门色谱柱都经过单独检测色谱性能取决于整个系统，而不仅仅是色谱柱管路和接头会造成系统的死体积系统死体积会导致:峰展宽峰形差柱效降低灵敏度降低优化HPLC系统以获得最大性能改变连接管路的内径（id）0.17mmid到0.12mmid减小流通池的体积标准流通池–13µL,10mm路径半微量流通池–5µL,6mm路径条件Luna®3µmC18(2),10x2.0mm(MercuryMS™柱芯)50:50乙腈/水，0.2mL/minHP1100w/二元泵优化前峰宽峰3:0.072min峰4:0.085min峰5:0.103min分辨率3/4=2.06分辨率4/5=1.89泵到进样器可以使用大一点的内径(0.010”=0.254mm)进样器到色谱柱管路内径最小化通常使用0.007”(0.178mm)或0.005”(0.127mm)ID色谱柱到检测器管路内径最小化大一些的内径会影响分离效果通常使用0.007”或0.005”ID检测器到废液瓶可以使用更大的内径(0.010”)11并非所有的色谱柱和接头都一样使用锥箍的种类/形状也各有不同固定长度不同(0.080”到0.130”)固定长度很关键管路一定要与色谱柱相匹配不匹配的接头会导致死体积的增大或漏液手紧接头(聚合物的)容易使用一体的符合柱头的形状色谱柱柱头不同厂商的接头如果超出锥箍的管路长度过长，锥箍将固定不当，导致漏液彻底冲洗HPLC泵和管路以去除气泡（打开冲洗阀来加速过程）连接色谱柱和进样器检查流向是否与色谱柱标签指示方向一致流动相起始流速为0.1mL/min，随后逐渐增大到正常流速停止流速并将色谱柱与检测器入口连接重启流速，用10-30个柱体积的流动相平衡色谱柱含有离子对的流动相平衡所需时间更长使用HPLC级溶剂使用最高纯度的化学药品和试剂使用前脱气和过滤所有流动相保证溶剂是互溶的验证缓冲盐在混合水/有机流动相中的溶解度（尤其采用从高水相到高有机相的梯度洗脱时）检查样品在流动相中的溶解度流动相保持pH在2.0到8.0之间（旧型硅胶和极性封尾相）或在1.5到10.0之间（新型硅胶）低pH会使键合相从硅胶上断裂下来（水解）高pH会使硅胶溶解如在接近pH极限下运行时，使用预饱和柱将使这些影响降到最低更新型的介质可以提供更宽的pH稳定性(1–12)背压通常保持在3500psi以下（常规的HPLC柱和系统）UHPLC柱具有更高的压力限（≥9000psi）流速必须符合色谱柱的背压限避免突然的压力变化万一背压升高，可以反冲色谱柱（向色谱柱制造商核实一下）为什么要这么做呢?最大限度地延长色谱柱的寿命减少系统损耗从长远来看，可以节约时间和成本获得最佳的结果怎样去做?流动相入口过滤头在线过滤器保护柱流动相脱气过滤所有流动相组分过滤所有样品样品基质是HPLC/UHPLC柱主要的污染物来源，常会导致:背压升高色谱性能降低峰形问题（分叉，拖尾）柱效降低分辨率降低在向HPLC/UHPLC柱进样前，去除潜在的污染物过滤样品(0.45或0.2µm针式滤头)样品净化–例如SPE,蛋白沉淀等优点通过去除颗粒和强保留的样品组分来保护昂贵的分析色谱柱延长分析色谱柱的使用寿命保持高柱效节约成本缺点额外的管路和接头给系统增大了死体积峰展变宽保留时间变化SecurityGuardSecurityGuard保护使免受有害化学污染物和微粒的伤害不会改变色谱图操作简易兼容几乎所有UHPLC、核-壳和亚-2µm柱，2.0到4.6mmID压力到20,000psi(1,378bar)延长色谱柱寿命色谱柱的维护保养咨询色谱柱制造商获取推荐的清洗程序和限制条件采用不带缓冲盐的流动相冲洗色谱柱以去除缓冲盐采用10倍柱体积的互溶溶剂冲洗，如甲醇或乙腈采用20倍柱体积的强溶剂（THF或IPA）以去除强吸附样品组分颠倒程序并用流动相平衡色谱柱保存条件影响色谱柱的使用寿命从不用缓冲盐保存色谱柱（长期保存）采用10倍柱体积且不带缓冲盐的流动相冲洗以除去缓冲盐对硅胶基质色谱柱一些典型的溶剂保存条件反相:65/35乙腈/水正相:异丙醇或己烷离子交换:甲醇SEC或二醇:0.05%NaN3水溶液或10%甲醇保护您昂贵的分析色谱柱延长柱寿命保证最佳的色谱柱性能保