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第19章生物性检材的个人识别各种生物检材血液血痕精斑唾液软组织硬组织(骨、牙)毛发指甲提取活体检材血迹检材精斑(混合斑)毛发人流组织及引产胎儿尸体检材对照检材血痕检验(BloodstainsTest)血痕检验的目的:1.是否血痕2.是人血还是动物血3.血痕的个人识别4.与案情有关的其他问题血痕检验的程序:1.肉眼检验2.预试验3.确正试验4.种属鉴定5.遗传标记测定6.其他检验肉眼检验阴性不是血痕或量太少或被破坏遗传标记测定第一节肉眼检验一.血痕的部位二.血痕的颜色三.血痕的形状1.滴状2.流注状3.擦拭状4.喷溅状5.血印痕6.血泊7.血水8.隐性血痕9.其他第二节预试验(PreliminaryTest)预试验即筛选试验,要求:1.是血痕一定呈阳性反应,预试验阴性即可认定不是血痕或血痕已被破坏。2.所需的检材量少,灵敏度高,即使肉眼看不见,也呈阳性反应。3.操作简便快速。血痕Hb或正铁血红素一联苯胺试验1原理2试剂:冰醋酸联苯胺无水乙醇饱和溶液3%过氧化氢3操作:血痕少许,置与滤纸上4注意事项二酚酞试验1原理2试剂3操作三鲁米诺试验1原理:鲁米诺的碱性溶液,在过氧化氢存在下,与血红素反应发出强荧光。2试剂:3操作:4注意:第三节确证试验(ConclusiveTest)血痕确证试验检验的物质是血红蛋白及其衍生物,确证试验阳性,表明检材中含有血红蛋白或其衍生物,可以判定为血痕。确证试验灵敏度一般不太高。常用方法:1结晶试验2显微分光镜检查:光谱检查一血色原结晶试验1原理:血红蛋白在碱性溶液中分解为正铁血红素和变性珠蛋白,在还原剂作用下,正铁血红素还原为血红素,后者与变性珠蛋白或其他含氮化合物(如吡啶烟碱)等,结合,形成血色原结晶。2试剂:高山氏试剂10%NaOH3ml混合置棕色瓶中30%葡萄糖10ml吡啶3ml试剂配置好第二日天使用较好,久置则反应缓慢,甚,至失效。3操作4结果桃红色的星状菊花状或针状结晶二氯化血红素结晶试验1原理:在酸的作用下,血红蛋白分解为正铁血红素,后者与氯离子反应生成氯化血红素结晶。2试剂:10%NaCl2ml冰醋酸10ml无水乙醇5ml3操作4结果:冷却后镜检出现菱形或瓦片状褐色结晶。5注意:加热须小心,若加热超过142度,血红素被破坏不能形成结晶。三显微分光镜检查1原理:有色物质能吸收一定波长的光,当日光通过有色物质时,再经过分光镜时,因其中某些波长的光被吸收,便会在光谱上相应波长区域内出现黑色吸收线。血红蛋白及其衍生物均系有色物质,具很强的选择性吸收光线的性质,再分光镜下检查是否有特定的吸收线,可确定是否是血痕。2方法第四节种属鉴定(SpsciesIdentification)种属鉴定一沉淀反应1原理用异种动物学清蛋白作为抗原,免疫动物,可刺激动物产生血清抗体,后者能与相应的血清抗原发生特意性沉淀反应,而与不相应的血清蛋白则不发身生反映。用已知抗血清与被检血痕的生理盐水寝液反应,确定血痕的种属。2抗血清:抗人血红蛋白血清抗人血清蛋白血清(1)要求(1)特异性好。(2)效价达10000倍以上,10分钟内出现明显沉淀。(3)澄清透明。(2)抗血清的种属特异性:a近缘反应:b抗血清交叉反映的消除:以纯化的抗原免疫动物,获得特异性血清。用吸收法除去血清中的交叉反应抗体。稀释抗原条整抗原抗体比例,消除抗血清的交叉反映。(3)抗血清的器官特异性3检材处理4影响沉淀反应的因素5方法(1)环状沉淀反应(2)琼脂扩散实验(3)对流免疫电泳二抗人球蛋白消耗试验1原理:人血痕浸液与抗人球蛋白血清相遇时,血痕浸液中的球蛋白就会与抗球蛋白特异性结合,抗人球蛋白血清的效价就会减少或丧失。再用经不完全抗D(球蛋白)致敏的红细胞做指示剂,观察经吸附后的抗人球蛋白血清的效价是否下降或消逝。如已消耗,则指示细胞呈现凝集抑制,即为阳性反应。本试验是检测人血清的球蛋白,此球蛋白在人体液或分泌液中存在极少,对抗人球蛋白血清无抑制作用。2方法(1)红细胞致敏(2)抗人球蛋白血清的标化(3)抗人球蛋白血清浸泡血痕(4)测定吸收后抗人球蛋白血清的效价三薄层凝胶等电聚焦四其他方法第五节血痕的血型测定一血痕的红细胞血型测定(一)血痕的ABO血型测定1.凝集素的测定2凝集原的测定A.B.H血型物质是一种多糖体,对干燥和高温有较强的抵抗力,当红细胞变形或细胞膜碎裂,其上血型物质仍能保持与相应凝集素特异结合的能力。应此,A.B.H血型物