原位杂交的基本原理原位杂交技术包括有：菌落原位杂交（colonyinsituhybridization）、斑点杂交法（Dotblot）、Southern印迹杂交（Southernblot）、Northern印迹杂交（Northernblot）、组织原位杂交（Tissueinsituhybridization）和基因组原位杂交（Genomeinsituhybridization)原位杂交组织化学技术在生命科学的研究中可视为一项革命性的技术。它使它们的研究从器官、组织和细胞水平走向分子水平。为各个学科的研究带来突破性的进展。其中特别突出的是细胞或组织的基因表达、染色体分析、病毒诊断和发育生物学。原位杂交技术主要步骤：染色体制片技术发展玻片的处理探针制备技术探针标记方法切口平移法切口平移法可对环状或线性双链DNA进行标记。一般对克隆的DNA片段用这种方法标记的效果较好。该方法使用时应注意：A.只能标记双链DNA，使用探针时要预先变性后再使用，而且标记时DNA片段不太小；B.DNA酶I使用的量要合适，太多会将DNA模板切碎，不能进行标记反应；太少则不能有效地打开缺口，使标记物不能进入缺口；C.标记时间不能太短，太短时间会造成标记量不足，影响杂交的进行。随机引物合成法随机引物法是近几年来兴起的一种有效的标记方法，可与PCR技术方法结合进行引物的标记。此法对于较小的DNA片段也能很好地进行标记，一般对基因组DNA进行标记时用这种方法的效果较好。除此之外，该方法有如下一些优点：A.模板的纯度不是很高也可以进行标记；B.反应比较稳定，可通过延长反应时间来增加探针产量；C.标记的探针活性高，易于杂交的检测；D.该方法可以在低熔点琼糖中进行，易于回收探针。原位杂交的基本步骤2.杂交液的配制杂交液所含成分除大约2.5ng/ul的标记探针DNA外，还包括：50%甲酰胺，是解双螺旋的分子，会破坏氢键的形成，促进DNA和探针变性后，进行杂交；10%硫酸葡聚糖，形成探针混合液基质，对DNA有浓缩作用，可提高杂交的反应速度10倍以上，但不影响探针的洗脱强度；杂交时常用浓度为5%～10%，但浓度高时会使溶液的粘度增大，不利杂交探针的渗透。0.1SDS,它有助于探针的渗透;2×SSC,作为调节探针洗脱强度的缓冲液;封阻DNA：浓度通常为探针DNA的1～100倍,作用是杂交掉探针中的相似序列，阻止探针DNA与非目标DNA的粘连，即用于阻止探针与非特异位点或非目标DNA杂交。3.变性及杂交制片DNA一般用70%去离子甲酰胺于70%下变性2分钟即可。杂交探针需于70-90℃下变性10分钟。在将探针DNA加到待检测的制片上后需于80-90℃下共变性10分钟。注意：在每次变性后，都需要将样品用冰迅速冷却，以保持变性后单链状态。4.洗脱5.检测以特异序列为探针鉴定rDNA在染色体上的分布中期及间期细胞遗传学分析染色体结构变异鉴定检测基因扩增和缺失基因或者特异性DNA序列的定位染色体RNA和基因组进化的研究附：染色体核型模式照片和核型图附：减数分裂花粉母细胞染色体配对情况附：染色体分带结果