二、实验原理藻类的培养液必须具备藻类的生长繁殖所需要的各种营养元素，并且营养盐的比例应该符合藻类生长繁殖的需要。不同种类的微藻对营养盐的质和量的需求不同，各有其特殊性，因此，制定某种微藻的一个培养液配方时，首先必须进行一系列的试验，了解这该种藻类对营养的要求，并在使用中验证配方的效果，加以改进，使配方达到更理想的水平。藻类对营养盐的需求也有很多共同点，因而一些培养液配方（如F/2）可应用于多种藻类的培养。进行微藻培养时，可根据培养藻类对营养的要求，选用合适的配方，在消毒水中按配方加入各种营养物质配成。所加肥料应保持清洁，某些不清洁肥料必须消毒，预防敌害生物通过肥料污染。绿藻培养液配方：①海洋三号扁藻培养液（海洋研究所，1960）：NaNO30.1g2Na3C6H5O7﹒11H2O0.02gK2HPO40.01gFe(SO4)3(1%溶液)10滴海水1000ml②亚心形扁藻培养液（湛江水产学院）：NaNO30.05g维生素B12200mμgKH2PO4(1%溶液)0.005g人尿2mlFeC6H5O70.2ml维生素B1200μg海水1000ml培养亚心形扁藻及其他绿藻使用，多用于小型培养和中继培养，如能加入海泥抽出液20ml，效果更好。硅藻培养液配方：①艾伦-内尔森（Allen-Nelson）培养液{Allen，E.J.etal（1910）}：A.KNO320.2g纯水100mlB.Na2HPO4.12H2O4.0gCaCl.6H2O4.0gHCl（浓）2.0ml纯水80mlFeCl3（溶液）2.0mlB液的配制法：先把氧化钙4g溶解于40ml纯水中。另外把磷酸氢二钙4g溶解于40ml纯水中，再把三氯化铁溶融液2ml，缓慢滴入，摇动，产生白色沉淀，加热，缓慢滴入浓盐酸2ml，沉淀的白色沉淀即重新溶解。把以上两溶液混合。使用时，取A液2ml和B液1ml，加入1000ml海水中，充分混合后加热消毒，消毒后静置24h，然后将上层清夜倒出使用。培养液是根据培养液配方配制的。为了减少每次称量的麻烦，固体的营养元素一般都配成母液（如浓缩1000倍的母液），在使用时，只要吸取一定的量加入培养液中即成。主要营养元素可以单项营养元素配成母液，也可以分成若干组，每组2种或多种营养元素同配在一起。微量元素和辅助生长有机物质也多种组合在一起，配成母液。在浓营养溶液中一般生物因不能忍受而死亡。三、实验材料及用具1、器材电炉；灭菌锅；pH计500ml试剂瓶（每组5个）；玻棒、500ml烧杯、50ml容量瓶（每组一个）/牛皮纸、细绵绳2、试剂：蒸馏水、海水各种试剂NaNO3;NaH2PO4；FeCl3EDTA；Na2SiO3.9H2O；盐酸硫铵素(VB1)；BiotinVH三、实验步骤（一）F/2(+Si)培养基母液的配制（用去离子水配制）1.A液500ml1000倍NaNO337.5g;NaH2PO42.5g2.B液500ml1000倍Fe-EDTA2.5g(FeCl31.6g+EDTA0.9g)3.C液500ml1000倍Na2SiO3.9H2O10g4.D液500ml1000倍盐酸硫铵素(VB1)5mg(试剂50mg/ml取100μl)BiotinVH0.025mg(试剂0.1mg/ml取250μl)VB120.025mg(试剂0.25mg/ml取100μl)先用维生素分别用纯水溶解混合，稀HCl将pH调到4.5~5.0，最后用纯水稀释至1升。膜过滤后冰冻保存。5.E液500ml1000倍CuSO4.5H2O0.0098mg；ZnSO4.7H2O0.022mgCaCl2.6H2O0.01mg；MgCl2.4H2O0.180mgNa2MoO4.2H2O0.0063mgA、B、D、E高压灭菌备用（三）F/2培养基配制1000ml(1升)F/2(+Si)培养基=1000ml(1升)过滤灭菌海水+1mlA液+1mlB液+1mlD液+1mlE液(+1mlC液)注意：煮沸的海水放置凉后（50度以下）再加母液，否则会出现沉淀。实验二单细胞藻类的培养三、实验步骤1、培养基配制：见实验一2、接种：一般培养的接种量为1/3～1/5.3、计数：分光光度计测定500nm（OD500）和750nm（OD750）吸光值；细胞计数板计数。4、每天测定一次，分别绘制以OD值和细胞绝对数目为纵坐标、时间为横坐标的生长曲线，分析细胞数目与OD500和OD750的相关性。5、观察并描述微藻不同生长时期的特点小球藻1、血球计数板计数方法：（1）搅拌：由于藻类细胞在培养液中分布不均匀，所以在取产前必须进行搅拌，搅拌后立即取样。（2）固定、稀释：运动细胞需加碘液杀死才能计数。如细胞浓度