..第13卷第1期色谱Vol13Nol1995lanuar年月CHINESEJOURNALOFCHROMATOGRAPHYJy1995高效液相色谱法同时测定强化牛奶中的维生素A和DZ赵慧芬李克杰曹燕叔郑建国(北京奶牛中心北京100085),:,液依次用somL水somL乙醇/水(11)三次前言,somL水洗涤直到水相不呈碱性为止(用酚酞指示。维生素A,D:(VA,VDZ)是人体所必需的营养剂检验)将萃取液用装有无水硫酸钠的漏斗过滤到,,物质。强化VAD消毒牛奶的出现,需要建立快速准蒸发瓶中于70℃水浴旋转蒸发近干内容物用氮,,。干立加lmLZmL无水乙醇用确的分析方法用高效液相色谱法(HPLC)测定脂气吹即入或定容作。溶性维生素已有报道〔,一们,其中VD测定需采用预色谱分析柱处理正色,时测生则用或相谱同定多种维素多采3。结果与讨论反相色谱本文将样品经皂化处理后,不经预柱处,理而采用反相双柱串联使VA及VD:与干扰杂质本文对前处理条件进行了优化,发现采用本文,,,,分离并且用325nm和265nm分别检测VA和上述方法萃取时溶液不易乳化定容时不必转移VD:,消除干扰。方法简便、快速,分离效果好,重现可减少损失。性好。试验发现样品经皂化、提取后不经预柱处理,直,接用反相色谱柱片BondaPakC,:甲醇/水作流动2实验部分,,,相紫外325nm265nm检测的系统分析VA分离,:,。.VD干果21仪器与试荆较好但与扰物无法分离使分析结偏高。a-oreaters用甲醇乙流善用NHPLC为美国Millip公司W色谱部产改/睛作动相仍未有所改若ov。,品,包括Baseline810色谱工作站,510泵,U6K进PakCI柱做同样试验发现VA与干扰物分离的效。naa:。,ovaaI。;。也不因此片dpkCNpkC联样阀484可调紫外可见光检测器果好将BO串,,实验用试剂均为优级纯或分析纯。使用以甲醇/水作流动相发现单柱未能分离的组,,:.在双柱上得以开(出个)vAvD22色谱亲件分分峰数增加与。,。·,色谱柱为片BondapakCl(30ox3gmm10拜m)干扰物能较好的分离并且流动相中水的比例越大:,。ovaa::.,,VD越间加长本用甲/与Npke(150火3gmm4拜m)串联流动相为的分离好但分析时文醇水,。,.,甲醇:水二96:4流速为1smL/min检测波长初(964)作流动相始为325nm,6min时调为265nm,灵敏度为一般强化VAD牛奶中VA的含量为1600~,,.:0oozAUFS,进样量为50拜L。2400IU/LVD的含量为400~600IU/LVA比。,,.ZZ23样品前处理vD的含量高对vAVD进行紫外光谱扫描最n,n。,吸收325m265m处同含的VA比准确移取20mL奶样于25OmL平底烧瓶中依大分别在样量.。,:37次加入20mLI%焦性没食子酸乙醇溶液15mLVD在其最大吸收处的响应高倍之多因此。,:14mol/L氢氧化钾水溶液70℃水浴皂化回流vD的测定比vA困难首先试验对奶样分析采用n,。。,653omin用20mL水转移到250rnL分液漏斗中并用2m进行全程检测VA仍然有较强的吸收但是,,lomL乙醇50mL乙醚和石油醚混合溶剂(1:1)洗样品经皂化提取等处理后仍不免有一部分杂质共。,涤烧瓶,将洗液加入到此分液漏斗中,振荡提取,静存经反相色谱柱分离时在VA醇附近出峰的物质,,置分层。放出下层于第二个分液漏斗中,再用使VA峰稍有拖尾而用325nm检测VA杂质峰消。n,。325m40rnL30mL混合溶剂萃取两次三次合并的萃取失即干扰基本消除本文开始时采用检测本文收稿日期:1994年3月15日,修回日期:1994年7月19日..62色谱13卷VA,待VA出峰后即约6min后,改用265nm检测在强化奶或未强化奶中添加一定量的vA和..VDZ,色谱图见图1,保留时间为435min的是VAVD:,按上述方法测定四次。VA的回收率为963士.,:,.,..醇保留时间为782min的是VD每一次测定需时69%变异系数为72%;VD:的回收率为1064士..。15min。25%,变异系数为24%表明本方法具有较高的对同一强化奶依上述前处理步骤重复测定六准确性。,,:·,次VAVD含量分别为2097士143IU/L和580土在0.75~2slU范围内vA的浓度与其响应..28IU/L,变异系数小于69%,表明本法具有良好的值即峰面积的线性关系良好,