TIANGENBIOTECH(BEIJING)CO.,LTDTIANGENBIOTECH(BEIJING)CO.,LTD――――qPCRqPCRqPCRqPCR系统系统系统系统“从从从从RNA提取到荧光定量提取到荧光定量提取到荧光定量提取到荧光定量PCR”解决方案解决方案解决方案解决方案内容概要内容概要内容概要内容概要荧光定量荧光定量荧光定量荧光定量PCRPCRPCRPCR的原理的原理的原理的原理荧光定量荧光定量荧光定量荧光定量PCRPCRPCRPCR的标记方法的标记方法的标记方法的标记方法荧光定量荧光定量荧光定量荧光定量PCRPCRPCRPCR解析方法解析方法解析方法解析方法SYBRSYBRSYBRSYBR法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项法实验流程及注意事项TIANGENTIANGENTIANGENTIANGEN公司荧光定量产品选择指南公司荧光定量产品选择指南公司荧光定量产品选择指南公司荧光定量产品选择指南实时定量实时定量实时定量实时定量PCRPCRPCRPCR技术技术技术技术：：：：利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析与常规与常规与常规与常规PCRPCRPCRPCR技术比较技术比较技术比较技术比较：：：：对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析，无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测荧光定量荧光定量荧光定量荧光定量PCRPCRPCRPCR原理原理原理原理－－－－－－－－定义定义定义定义扩增曲线扩增曲线扩增曲线扩增曲线荧光阈值荧光阈值荧光阈值荧光阈值CtCtCtCt值值值值荧光定量荧光定量荧光定量荧光定量PCRPCRPCRPCR原理原理原理原理－－－－－－－－常用名词概念常用名词概念常用名词概念常用名词概念Cycle（（（（循环数循环数循环数循环数））））Rn（（（（荧光强度荧光强度荧光强度荧光强度））））基线期基线期基线期基线期对数期对数期对数期对数期平台期平台期平台期平台期荧光基团荧光检测元件荧光定量荧光定量荧光定量荧光定量PCRPCRPCRPCR原理原理原理原理－－－－－－－－扩增曲线扩增曲线扩增曲线扩增曲线Cycle（（（（循环数循环数循环数循环数））））Rn（（（（荧光强度荧光强度荧光强度荧光强度））））前前前前15151515个循环信号作为荧光个循环信号作为荧光个循环信号作为荧光个循环信号作为荧光本底信号本底信号本底信号本底信号（（（（baselinebaselinebaselinebaseline））））荧光域值的缺省设置是荧光域值的缺省设置是荧光域值的缺省设置是荧光域值的缺省设置是3333～～～～15151515个循环的荧光信号的标个循环的荧光信号的标个循环的荧光信号的标个循环的荧光信号的标准偏差的准偏差的准偏差的准偏差的10101010倍倍倍倍手动设置手动设置手动设置手动设置：：：：大于荧光背大于荧光背大于荧光背大于荧光背景值和阴性对照的荧光最高景值和阴性对照的荧光最高景值和阴性对照的荧光最高景值和阴性对照的荧光最高值值值值；；；；进入指数期的最初阶段进入指数期的最初阶段进入指数期的最初阶段进入指数期的最初阶段真正的信号真正的信号真正的信号真正的信号::::荧光信号荧光信号荧光信号荧光信号超过域值超过域值超过域值超过域值Threshold荧光定量荧光定量荧光定量荧光定量PCRPCRPCRPCR原理原理原理原理－－－－－－－－荧光域值荧光域值荧光域值荧光域值基线期基线期基线期基线期对数期对数期对数期对数期平台期平台期平台期平台期CtCtCtCt值的值的值的值的定义定义定义定义：：：：PCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数Cycle（（（（循环数循环数循环数循环数））））Rn（（（（荧光强度荧光强度荧光强度荧光强度））））Ctvalue荧光定量荧光定量荧光定量荧光定量PCRPCRPCRPCR原理原理原理原理－－－－－－－－CtCtCtCt值值值值横轴横轴横轴横轴：：：：PCR反映循环数反映循环数反映循环数反映循环数纵轴纵轴纵轴纵轴：：：：荧光信号量荧光