实验一细胞凝集反应实验目的1.1了解细胞膜的表面结构。1.2掌握凝集素促使细胞凝集的原理。1.3学习研究细胞凝集反应的方法。1.4掌握耳缘静脉兔子取血的方法。2．实验原理凝集素是一类含糖（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。目前已发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，特能提的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。常用的为植物凝集素，通常以其被提取的植物命名，如伴刀豆凝集素A、麦胚凝集素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他们的总称。在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（又称为糖萼）。凝集素能与细胞外被中的糖分子连接，在细胞膜结构间形成“桥”，从而引起细胞凝集。凝集素引起的血细胞凝集，其细胞膜结构没有发生变化，与血液凝固中发生的复杂生物化学过程完全不同；另外，凝集素能与不同的糖蛋白特异性结合，加入域凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集，但是凝集素能与不同的糖蛋白特异性结合，加入与凝集素互补的的糖可以抑制细胞的凝集，但是凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，因此，Ponder(1983)提出应称“凝集素组织化学”而不能称为“凝集素免疫组织化学”。凝集素使细胞凝集与血小板凝血的原理不同。当人体受伤流血时，血小板就迅速向血管破裂处大量聚集。它们首先释放肾上腺素、5－羟色胺等具有收缩血管作用的物质，使受损血管不同程度地紧闭，减少血流量。然后血小板一旦与非血管内膜表面接触，便会迅速扩展，颗粒向中央集中，并伸出多个伪足，转变成树突型血小板，大部分颗粒随即释放，血小板之间融合，成为粘性变形血小板。粘性变形血小板在伤口大量堆积粘附形成血栓，堵住伤口，制止流血。如果伤口很大那还要与纤维蛋白一起封堵。血小板凝血是一个生理反应，要注意与凝集素使细胞凝集相区分。3.实验用品3.1材料家兔3.2试剂PBS缓冲液土豆凝集素4.实验步骤4.1取土豆去皮块茎2克，加10mlPBS缓冲液，浸泡24小时，浸出的粗体液中即含有可溶性土豆凝集素。4.2抽取兔子静脉血，抽血之前在抽取1ml抗凝剂，加生理盐水在1000r/min条件下，离心5分钟。重复三次离心，最后按压积红细胞体积用生理盐水配制成1%的红细胞悬液。4.3分别用滴管吸取土豆凝集素和1%的红细胞悬液各一滴，置双凹片的左孔内，充分混匀。4.4同时分别用滴管吸取PBS缓冲液和1%的红细胞悬液一滴，置双凹片右孔内，充分混匀，作对照实验。4.5摇晃5-10分钟后，观察有无发生细胞凝集并置于显微镜下观察。5.注意事项注意控制加入双凹片孔中的液体的量，以免对双凹片的2个孔中的液体混合。显微镜下观察时，注意淀粉球和细胞的区分。淀粉球呈白色球状，略大于细胞。6.预期实验结果肉眼观察，对照组中的红细胞沉积在双凹片凹槽底部呈大红点；用凝集素处理的实验组，颜色越来越浅，透明度逐渐变高，最终，背景颜色变为透明，红细胞呈颗粒状聚集。低倍镜下可以看到对照组中红细胞分布较均一，无凝集；实验组中红细胞聚集在一起。7.实验结果7.1肉眼观察，可发现对照组中的红细胞明显沉积在双凹片凹槽底部，滴加凝集素的实验组的背景颜色变透明，红细胞呈颗粒状聚集。（如图1.）7.2在10×4的显微镜下观察，可看到对照组中的红细胞分布较均一，无凝集；实验组中的红细胞凝集在一起。（如图2.）图1.土豆凝集素对红细胞的凝集（肉眼观察）A.对照组B.实验组图2.显微镜下土豆凝集素对红细胞的凝集（10×4）A.对照组B.实验组