酶标（ELISA）1.ELISA的原理2.ELISA的类型3.试剂准备：免疫吸附剂结合物酶底物的准备4.对照设定5.标本的采取和保存6.结果判断ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。ELISA技术原理1.1抗原抗体反应1.1.2特异性1.1.3最适比例1.1.4敏感性2ELISA的类型双抗体夹心法测抗原双抗原夹心法测抗体3.ELISA的试剂(A、B、C三部分)3.1ELISA的试剂准备A3.2ELISA的试剂准备B酶纯度高，催化反应的转化率高，专一性强，性质稳定，来源丰富，价格不贵，受检标本中不存在相同的酶。酶结合物保留活性部分和催化能力，底物易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定等。在ELISA中，HRP（辣根过氧化物酶），AP（碱性磷酸酶），葡萄糖氧化酶，β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。HRP是一种糖蛋白，含糖量约为18%，分子量为44000，是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成，是一种卟啉蛋白质。3.3试剂准备C酶的底物AP的底物为磷酸酯酶，一般采用对硝基苯磷酸酯作为底物。产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有吸收峰。用NaOH终止酶反应后，黄色可稳定一时间。AP也有发荧光底物（磷酸4-甲基伞酮），可用于ELISA作荧光测定，敏感度较高于用显色底物的比色法。3.4对照设定参考标准品酶标基本步骤加样温育洗涤洗板机洗板机使用注意事项洗板机的应用范围显色酶标仪酶标仪的检测原理酶标仪配件酶标仪配件MD公司：业界老大，产品质量过硬，做工精细。但对中国支持服务较差、管理混乱。Bio－Tek公司：与MD公司伯仲之间，产品质量过硬，做工精细。进入中国市场十多年，市场占有率高，服务较好。PE公司：著名的分析仪器生产商，但酶标产品单一、简单，后续支持不足。Tecan公司:著名的液体分装设备生产商，高端产品较好，底端产品较差。Bio-tekELx800酶标仪的使用3、上机操作开机→机器自检→进入主菜单MainMenu→按READ功能键→选择要做项目的编号及名称→输入要做的样本数量→按ENTER键→把检测板放入机器运载台上→打印机打印出结果（打印机要打开并放好纸）→取走检测板，按ENTER键→选择要做项目的编号及名称→按MainMenu键，进入主菜单MainMenu→操作结束酶标仪的使用注意事项ELISA的操作要点