蒲地蓝消炎口服液中黄芩苷的含量测定方案一、设计背景蒲地蓝消炎口服液是医保乙类的处方药，价格亲民效果俱佳。蒲地蓝消炎口服液中主要的成分有蒲公英、苦地丁、板蓝根和黄芩。其性状为棕红色至深棕色的液体、气微香，味甜、微苦。其中，组方中的蒲公英起到清热解毒，利尿散结的作用；苦地丁主要有清热解毒的疗效；板蓝根用于辅助清热解毒和凉血利咽；黄芩则有止血、清热燥湿和泻火解毒的作用。蒲地蓝消炎口服液临床上主要用于治疗风热型的感冒，对于扁桃体炎、咽炎、疖肿、牙龈肿痛、伤风、流黄鼻涕、脓痰、咳嗽、发烧尤其是发高热，都有很好的功效和作用。通常1天可以服用3-4次，但是服药的过程中，不可吃辛辣和过于刺激性的食物，对于脾弱虚寒的患者应该谨慎服用，因为其具有退热的效果，所以对于体温过低者也不宜服用。鉴于蒲地蓝消炎口服液在临床上应用广泛，其质量控制显得尤为重要。而黄芩苷（化学结构式见下图1）是蒲地蓝消炎口服液中的主要有效成分，具有利尿消肿，解毒，排脓等功效。本方案选择黄芩苷作为指标成分，设计一种测定蒲地蓝消炎口服液中黄芩苷含量的方法，为蒲地蓝消炎口服液的质量控制提供相关参考资料。图1黄芩苷二、设计依据经查阅“中国知网”有关黄芩苷的含量测定相关的文献资料及2020年版《中国药典》有关黄芩项下的资料可知，黄芩药材或其他复方制剂中黄芩苷的含量测定方法主要有荧光分光光度法、高效液相色谱法或超高效液相色谱法。其中，李祥昀及李道祥等人采用荧光分光光度法检测了黄芩中黄芩苷含量，并验证了方法的可靠性。沈丹萍和陈康等人采用高效液相色谱法同时测定了三九胃泰颗粒中包括黄芩苷在内的8个成分的含量，方法中以乙腈和0.05%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，检测波长为250nm。林珊和陈达鑫等人则采用UPLC的方法测定了清达颗粒和清眩降压汤中黄芩苷的含量，方法中考察了乙腈-00.05%磷酸溶液和乙腈-水的流动相系统对测定的影响，考察了检测波长的选择，最终选择以乙腈-0.05%磷酸为流动相进行梯度洗脱，以280nm作为检测波长测定黄芩苷的含量，验证了方法的有效性。《中国药典》（2020年版）中，也采用高效液相色谱法测定的黄芩苷的含量，以甲醇-水-磷酸作为流动相，检测波长为280nm。综合相关参考资料可知，高效液相色谱法比荧光分光光度法的分离能力更强，而检测成本比超高效液相色谱法要低，故本方案拟采用高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎口服液中黄芩苷的含量。三、设计方案1.仪器与试剂（1）仪器Waters2695高效液相色谱仪（二元梯度洗脱高压输液泵、紫外检测器和色谱数据处理系统)、色谱柱、超声波仪、微量注射器，研钵、称量瓶、量瓶、分析天平(感量0.01mg)、滤纸、漏斗、微孔滤膜等。图2Waters2695高效液相色谱仪（2）试剂蒲地蓝消炎口服液，购自云南白药集团股份有限公司，规格为10ml/支；黄芩苷的对照品购于中国食品药品检定研究院，纯度为95.4%（供含量测定用）；甲醇（分析纯，天津市康科德科技有限公司）；乙腈（色谱纯，科密欧化学试剂有限公司）；磷酸（分析纯，天津市康科德科技有限公司）；水为娃哈哈水（杭州娃哈哈集团有限公司）；2.溶液的制备（1）对照品溶液的制备取黄芩苷对照品5mg，装入100ml的量瓶当中，加入甲醇约40ml振摇使黄芩苷溶解，继续加甲醇稀释至刻度线，即得每1ml中含黄芩苷约为50μg的对照品溶液，待用。（2）供试品溶液的制备取符合装量差异项下的蒲地蓝消炎口服液5支，均置于同一干净烧杯中，摇匀，精密量取蒲地蓝消炎口服液1ml，置于100ml的容量瓶当中，用甲醇稀释到刻度线，缓慢均匀摇晃数次，放置备用，即得供试品溶液。（3）阴性样品溶液的制备除不加黄芩，其余按蒲地蓝消炎口服液的处方制备不含黄芩的阴性样品，按供试品溶液的制备方法配制溶液，即得阴性样品溶液。3.色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（大连依立特色谱柱，4.6mm×25mm，5μm）；以乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0-30min：20%-70%A）（可根据试验结果进行调整）；流速为1.0ml/min；检测波长为280nm（可根据试验结果选择无干扰的最大吸收波长处）；色谱柱温度为35℃；进样量为20μl，理论板数按黄芩苷峰计算应不得少于2500。4.高效液相色谱仪的操作方法①根据需要选择不同的滤膜，过滤流动相。乙腈采用有机滤膜过滤，磷酸水溶液采用水膜过滤。②对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。③打开HPLC色谱工作站（包括计算机软件和色谱仪），按顺序连接好流动相管道，连接检测系统。④进入HPLC控制