酶免技术的分类实验注意事项实验中常见问题及解决(jiějué)方法均相法双抗原夹心(jiāxīn)法（测抗体）直接法双抗体夹心(jiāxīn)法（测抗原）酶免法间接法测抗体、抗原EIA非均相法ELISA竞相法测抗体、抗原捕获法测IgM抗体enzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附测定法双抗体夹心(jiāxīn)法HBsAg、HBeAg双抗原夹心(jiāxīn)法HBsAbHBcAb、HBeAbHDVIgG/M、HEVIgG/M测IgG测IgMHAV-IgM/2、试剂使用(shǐyòng)前平衡至室温配置洗液应使用(shǐyòng)去离子水或蒸馏水，保证水的新鲜3、设计实验设计好孔位，通常阴阳对照孔各2孔、空白1孔。必要时做好标注，避免错误4、加样样品应全部加于反应孔底部，避免(bìmiǎn)液体悬挂在孔壁上。加样量准确！加下一标本时更换吸嘴5、加酶结合物一般使用滴瓶滴加滴加时应保持瓶身垂直、加液速度适中，使液滴大小均匀一致一步法时先加样本后加酶，不可颠倒(diāndǎo)顺序一般空白孔只加底物和终止液，而不能加入其它物质，尤其是酶结合物6、温育温度、时间要严格控制！最好使反应杯尽快(jǐnkuài)升温到所需温度最好放入湿盒或水浴箱中反应板贴上即时贴微孔板放入水浴箱后，孔内温度上升到37℃需要一定时间。但实际工作中很少有人注意这个问题，通常是放入即计时，导致实际温育时间不够，弱阳性标本漏检。解决：微孔板放水面上或湿盒中纱布浸透水，使板底部直接与37℃接触，迅速达到温度。7、洗板使用专用洗涤液一般洗涤4~6次若手工洗涤，前两次洗涤应不溢出反应孔污染后面几次洗涤应加满所有孔干净每次加洗涤液后应浸泡30秒再甩去洗液反应板倒扣吸水纸上拍干洗板时应注意非离子去垢剂的浓度。洗液中Tween20高于0.2%,可使包被子固相上的抗体(kàngtǐ)抗原解吸附而影响测定下限。8、加底物底物A液通常是H2O2还原剂底物B液通常是TMB（3、3′、5、5′-四甲基联苯胺）氧化剂TMB氧化后呈蓝色，被2NH2SO4终止后呈黄色，450nm波长(bōcháng)处有最大吸收峰底物B应避光保存，实验时加完底物A、B保温时也应避光保存。9、比色空白孔校零，读取各孔OD值单波长or双波长的选择：单波长通常(tōngcháng)是对显色具有最大吸收的450nm或492nm双波长酶标仪则在敏感波长450nm和非敏感波长630nm下各测定一次。使用双波长时不必设定空白孔，否则会造成孔吸光度数为负数。若底物为OPD（邻苯二胺），波长为492nm若底物为TMB，波长为450nm10、结果判读不同(bùtónɡ)试剂，CUTOFF值计算方法不同(bùtónɡ)常见问题及解决办法现象现象现象设备(shèbèi)你愿意…检验匠？流水线上的熟练工检验师？用心、头脑(tóunǎo)快乐价值感谢您的观看(guānkàn)！内容(nèiróng)总结