主讲内容第一部分实验室的设计细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即：实验准备（培养基配制，洗涤与灭菌）；无菌操作；控制培养。从总体上来分，实验室主要分为两类：基本实验室：辅助实验室：1、基本实验室：准备室接种室培养室作用植物细胞和组织培养所需器具的洗涤、干燥和保存；培养基的配制、分装和灭菌；化学试剂的配制；重蒸馏水的生产等。设计要求面积20m2左右。通风透光，地面防滑，墙面防潮。▲实验台架▲大、小水槽▲烘箱▲冰箱▲天平系列▲pH计▲高压消毒锅▲各种玻璃器皿▲药品柜▲（磁力）搅拌器▲电炉▲蒸馏水器其中：玻璃器皿包括三角瓶、试管、培养瓶、培养皿、烧杯、量筒、移液管等移液枪（根据条件需要）由枪和枪头组成其他：锅、微波炉等磁力搅拌器电子天平pH计微量移液器接种室——也叫无菌操作室无菌操作室并非无菌，但应该保持清洁作用供外植体的接种，培养物的转移和原生质体的游离培养操作之用。设计要求墙壁光滑平整，地面平坦无缝，除出入口和通气口外，应当密闭，空气不能对流，或者空气经净化后进入室内。无菌室旁边应设有缓冲间，缓冲间内应有紫外灯，随时可进行灭菌。无菌室内的日常灭菌：定期用甲醛和高锰酸钾混合后熏蒸，产生大量蒸汽，杀灭微生物。使用前处理：用新洁尔灭（1：50）擦净，然后用紫外灯照射灭菌至少20分钟，操作前用70%酒精喷雾。设备△超净工作台：内设紫外灯、吹风装置、过滤装置等每次实验前要用紫外灯灭菌20分钟以上，然后喷酒精灭菌，工作过程中注意一直开着吹风机，并且一定要关掉紫外灯，过滤网应经常清洗。其它部件：△离心机：分离原生质体用；△点融合仪：细胞融合用。离体组织和试管苗生长发育的场所，应为培养物创造适宜的温、光、气等条件。设计要求培养室内要求内壁保温、光滑、室顶高2.6m左右，易于控制温、湿度，窗上要求装双层密封玻璃窗，室内有足够电源。设备2、辅助实验室：细胞学实验室摄影室及暗室生化分析室细胞学实验室细胞工程实验室基本设备配制小结光温控制设备：时间程序控制器、空调及温度感应器。细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜第二部分基本操作技术一、洗涤技术（一）器皿洗涤常规洗涤微生物大量污染的洗涤△微生物污染器皿加压灭菌后再洗涤（二）、试验材料的清洗清洗目的：来自自然界的试验材料，包括来自土壤中的幼茎、磷茎，滋生着各种微生物，尤其是细菌的芽孢和真菌的孢子，一旦与培养基接触，就会很快的繁殖起来，造成培养基和培养材料的污染。清洗方法：先用自来水冲洗5分钟，然后用中性洗涤剂清洗，注意勿损伤试验材料。再用自来水流水冲洗半小时，用于下一步的药剂灭菌。二、灭菌、消毒技术高压高温处理（工具、器皿、培养基等）物理或化学处理；火烤后的物体；健康的动植物不与内外部表面接触的组织内部可能是无菌的（有时也有内生菌，但不会影响培养，也不会污染）（二）灭菌、消毒技术作用和意义植物组培中，凡用于培养和无菌操作的房间、器具、培养瓶、培养基，培养材料和操作者的衣物和手都应随时进行灭菌，以确保不受杂菌污染，否则，由于杂菌的生长繁殖速度一般都比培养的组织快得多，最终将把组织全部杀死，这些污染微生物还可能排泄对植物组织有毒的代谢废物，因此在培养容器内部保持一个完全无菌的环境是绝对必须的。（三）灭菌、消毒种类消毒、灭菌的对象：★接种室★材料（外植体）：完全杀死材料表面的微生物过程：洗洁精→酒精→氯化汞等★器皿用具消毒（灭菌）★培养基（三）、培养基、器具的灭菌用灭菌锅灭菌：一般121℃，灭菌20分钟。自动锅：加足水后，调好时间、温度、即可自动运转。手动锅:加足水后，关好，通电。待压力升到0.5kg／c㎡时，打开排气阀排除锅内的冷空气。然后关闭排气阀，升至1.1kg／c㎡(121℃左右)时计时，用通电、断电来保持20分钟。待降至压力为0时取出。器具的灭菌：也可用烘箱160℃，90～120分钟（四）、过滤除菌培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培养基中某些成分遇到高温分解（如某些激素GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌或者两者结合。另外酶等也需要过滤灭菌；灭菌方法：将激素或酶配成一定浓度，用注射器过虑，0.2－0.25微米。配制培养基时，先将培养基高压灭菌，待温度降至50℃左右时，加入适量的已过虑除菌的激素等，然后分装。（五）、外植体的选择与消毒：2、外植体的消毒：外植体在接种之前，须经严格的灭菌，同时又要注意不损伤外植体。不同灭菌药剂杀菌力不同，故在使用不同的药剂时，需要考虑使用浓度和处理时间，对不同植物种类的不同外植体，处理也有不同。另外，外