NET-1与NET-2到NET-7一起统称为NET-X，它们是由Serru等于2000年在EST数据库中发现的7个新的含4次跨膜蛋白超家族(transmembrane4superfamily或tetraspanfamily,简称TM4SF)的成员。p27作为细胞周期重要负性调控因子，受多种因素调控。细胞外信号调节激酶(ERK)是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)中一条主要和经典的并与人类癌症关系最为密切的途径，p27蛋白是ERK信号通路下游的重要分子。p27的基因突变非常罕见，对p27的功能调控主要发生于转录后阶段，通过蛋白磷酸化修饰来发挥其生物学效应。p27分子内存在数十个潜在的磷酸化位点，其中以N端第10位丝氨酸（S10）及C端第187位苏氨酸（T187）最为重要，占p27蛋白总磷酸化水平70%以上。p-p27T187可启动S期激酶相关蛋白2（Skp2）分子介导的p27多聚泛素化及随后降解。有证据显示JAB1与p27的出核转运有关。它能够促进p27从胞核向胞浆的移位，加速p27泛素蛋白酶体途径的降解。1、构建重组表达质粒NET-1siRNA、myc-NET-1和pEGFP-myc-p27(WT)。2、细胞培养与转染3、Westernblot检测蛋白表达4、免疫共沉淀分析NET-1与p27的相互作用关系5、免疫组化检测6、临床病例与预后分析NET-1在HCC、癌旁组织和血管瘤旁肝组织中表达呈递减趋势，不同组间的差异均有显著的统计学意义。JAB1、p-p27T187、p-p27S10和PCNA在HCC中表达显著高于癌旁组织和血管瘤旁肝组织，但后两组间差异无显著统计学意义；p27在癌旁组织和血管瘤旁肝组织中表达显著高于HCC中，但前两组间差异无显著统计学意义。(1)NET-1与p27Kip1的表达呈负相关(r=－0.6078，P<0.001)(2)NET-1与JAB1的表达则成正相关（r=0.6866，P<0.001）(3)NET-1与PCNA的表达则成正相关（r=0.5645，P<0.001）（1）Log-rank单因素分析影响预后的因素：癌淋巴结转移与NET-1、p27、PCNA、p-p27T187p-p27S10表达。（2）Kaplan-Meier生存曲线（3）Cox比例风险模型多因素生存分析Thankyou！