第24卷第lO期水产科学Vo1．24No．102005年1O月FISHERIESSCIENCEOct．2o05养殖水体中高效氨氮降解菌的分离与鉴定侯颖，一，孙军德2，徐建强．一，徐超蕾2(1．河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳471003；2．沈阳农业大学，辽宁沈阳110161)摘要：以(NH4)zso4为惟一氮源的选择性培养基，从养鱼池水中分离筛选到l株高效氨氮降解菌x2。当NI-h一N初始质量浓度为50mg／L时，该菌株在24h内的氨氮降解率>95％，并具有硝酸还原和亚硝酸还原能力。初步鉴定该菌株为巨大芽孢杆菌(gaciEusmegaterium)。关键词：养殖水体；氨氮；降解；巨大芽孢杆菌中图分类号：$917．1文献标识码：A文章编号：1003．111l(2~05)10-0022473随着水产养殖集约化的发展，养殖水体的污染问题越×10～、1．0×10稀释液各0．1ml，在分离培养基上涂乎板，来越严重，特别是氨氮污染。近几年来，不断发生养殖生物置28℃培养，观察氨氮降解菌的生长情况。选取菌落大、数氨氮中毒的事件，给水产养殖业带来了严重的经济损失L1]。量多的氨氮降解菌接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，进行如何解决养殖水体中的氨氮污染问题，已成为净化养殖水活化培养。质的研究热点。就目前来看，常用处理养殖水体氨氮污染1．4高效氨氮降解菌的筛选及防治养殖生物氨氮中毒的方法主要有物理、化学和生物3吸取l0ITl1活化菌液，转入离心管中，3000r／rnin离心10种L2】。传统的物理及化学方法虽然见效快，但投入较大且rnin，去除上清液；再用10ITl1生理盐水洗涤沉淀，混匀，再次容易引起二次污染3，而生物法则被认为是未来最有潜力、离心；如此重复3次，以除去菌种活化过程中产生的氨氮。最有发展前景的方法，因为生物法在调节养殖水体水质的最后用10ITl1生理盐水洗下沉淀，接入装有100ml筛选培养同时不会造成二次污染，还对养殖水体中的生态平衡起到基的三角瓶中，28℃摇床培养24h。吸取10ITl1培养液于一定作用。本文旨在通过对养鱼池塘中氨氮降解菌的分离3000r／rn／n下离心10min，去除菌体。用靛酚蓝分光光度筛选，获得能降解养殖水体氨氮的高效菌株。为养殖水体的法【4测定上清液中氨氮含量，同时测定未接菌的培养基中氨氮污染问题寻求一种更为安全有效的防治措施。的初始氨氮含量，计算各个氨氮降解菌的降解率。选取降1材料与方法解能力最强的氨氮降解菌作进一步研究。1．1菌种来源1．5菌株最大吸收波长的测定本试验所分离到的高效氨氮降解菌来自沈阳市东陵区取1．4中得到的高效菌株的1824h牛肉膏蛋白胨培后陵养鱼池塘。养液在380—600nln的波长下以未接种的培养基为空白测1．2培养基定其OD值，以波长为横坐标，以OD值为纵坐标作图，找出富集培养基：葡萄糖5．0g，(Nil,)2SO42．0g，NaG2．0g，高效氨氮降解菌的最大吸收波长。FeSO4‘7H2O0．4g，K2HPO41．0g，Mg~)4。7H2O0．5g，水10001．6菌生长量及氨氮浓度随时间的变化将高效氨氮降解菌接入筛选培养基中，28。C摇床培养24ITl1，pH7．2—7，4；分离培养基：富集培养基加2％琼脂；菌种h，自接种后开始每隔2h取样一次，每次取l0Tnl，先在其最活化培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基；筛选培养基：葡萄糖5．0g，(NH4)2sO40．25g，NaC11．0g，K2HPO40．5g，MgSO4‘大吸收波长下测定其OD值，然后离心取上清液测定其中氨氮含量，以时间为横坐标，OD值与氨氮含量为纵坐标作图。7H2O0．25g，水1000ml，pH7．2—7．4，其中氨氮含量约为501．7高效氨氮降解菌的初步鉴定mg／L。培养基在121℃条件下灭菌15min。根据《常见细菌系统鉴定手册》】对高效氨氮降解菌的1．3氨氮降解菌的富集分离形态特征、生理生化特征等方面进行了初步鉴定。取10Tnl水样，接入装有100ml富集培养基的250rnl三角瓶中，于28℃下摇床培养7d，且每隔1d向其中加入5％2结果与讨论的(N地)2so4溶液1nd，以淘汰不能利用NH4的微生物。2．1氨氮降解菌的富集分离吸取富集培养液1ml，用无菌水制成1．0×10～，1．0×10～，通过富集分离，从所采水样中共分离到5株生长良好，1．0×10一，⋯⋯1．0×10—的稀释液，分别吸取1．0×10～、1．0且菌落直径>5inm的氨氮降解菌，分别编号为)(1、x2、x3、收稿日期：2O04一ll一21；修回日期：2005—01—06．作者简介：侯土颤壤(与19环7§境微)女生，