荧光定量PCR技术在临床诊断中的应用九十年代中期PCR临床应用在国内全面展开1998年荧光定量PCR技术开始在中国应用于临床检测灵敏度高快捷简便对样品纯度要求低可以相对定量Ct值的意义感染性疾病的诊断母婴传播的控制与观察遗传疾病的诊断肿瘤的诊断法医学鉴定早期诊断（超早期诊断）病情评估和预后判断抗病毒药物疗效的观察、指导新药验证一感染性疾病1.病原体含量与病情之间的关系2.病原体含量与用药之间的关系3.药物及疗法的研究与开发4.新的病原体分子诊断标准5.新的愈后指标6.传染病发病的监控、预测与预防临床应用遗传病（a、b-地中海贫血、唐氏综合症、性别连锁遗传病）1.等位基因检测2.多基因遗传病的突变检测3.基因表达异常所致遗传病检测荧光定量PCR在病原体检测中的应用肝炎病毒定量检测HBVHCV（一）乙型肝炎病毒结构及特点HBV3.血清学指标(－)不能排除HBV感染。HBVHBV感染与干扰素治疗HBV感染与干扰素治疗HBV感染与干扰素治疗拉咪呋啶：有显著降低高病毒载量作用，近期疗效颇有优势，但是长期使用可导致HBV变异，患者易出现耐受性，而且容易出现停药后反弹。0-20-40-60-80-100HBV病毒特点：1.单正链RNA病毒2.E1和E2区基因高度变异性(二)HCV-RNA定量检测的临床意义HCV二常见性传播疾病病原体艾滋病艾滋病是一种有明确病原体的可通过人之间一定传播途径传播的慢性传染病，属于《传染病防治法》中规定的乙类传染病HIV病毒：多亚型和多变异艾滋病病毒在外界的抵抗力艾滋病的诊断荧光定量PCR的应用为艾滋病的初筛和辅助检查提供了有力的工具NGHCTUU1.非培养或形态学检查的诊断技术，快速、特异、敏感。2.对无症状或症状轻者，可以早期确诊。3.对NGH、CT、UU等混合感染者，诊断和鉴别诊断。4.指导用药、考核疗效。NGH/CT/UU人乳头瘤病毒感染与致病人乳头瘤病毒感染与致病HPV1.对典型病例可以明确诊断。2.对临床表现和组织病理改变都不典型的病例同样可以做出诊断。3.对亚临床和隐性HPV感染做出诊断。4.基因分型。5.考核疗效与预后。6.病毒载量与患癌症风险。HPV检测方法二代杂交捕获HC-II（核酸杂交检测）唯一获美国FDA认证可用于临床的HPVDNA检测技术,已获欧洲CE及中国SDA认证HC-II基本原理与实验步骤图示特点：检测方法简单且效率高高危HPV检测敏感度高（98%）,比细胞学具有更高的敏感度高的阴性预测值（99%）如HPVDNA检测阴性，该妇女在5～10年内患宫颈癌的机会几乎为零有统一的临床判定标准（≥1.0pg/ml为阳性）,重复性好操作不受采集样本的影响，不受操作环境的误差影响检测范围：可同时检测13种高危型HPV：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59、68(与HSIL/癌有关)荧光定量PCR有其优于普通PCR的特点，可以与第二代杂交捕获(HC)试验一起用于粗筛高风险人群.HPV手足口病（hand-foot-mouthdisease，HFMD）HFMD的病原人肠道病毒感染的一般致病机制致病特点中国HFMD的流行加强HFMD病原检测和监测的十分必要手足口病的实验室检测三结核杆菌与呼吸道病原体检测结核杆菌流行现状（1）结核杆菌流行现状（2）结核杆菌引起的感染常规结核病实验室诊断方法及不足荧光定量PCR检测TB-DNA的意义3.荧光定量PCR检出结核杆菌阳性率显著高于痰涂片抗酸染色和改良罗氏培养法。4.TB-DNA浓度可用于判断疗效：痰标本中结核杆菌的数量呈逐渐下降趋势，TB-DNA拷贝数下降。根据病原体DNA浓度，对药物治疗及疗效观察提供参考依据CP、MP感染可致咽炎、支气管炎和肺炎，潜伏期约2-3周，通常起病较缓慢。持续性咳嗽。荧光定量PCR用于非典型性肺炎的诊断甲型H1N1流感“猪流感”更名为“甲型H1N1流感”世界卫生组织4月30日宣布，从当日起，该组织不再使用“猪流感”一词指代当前疫情，而开始使用“A（H1N1）型流感”一词。与之相对应，我国的官方文件从5月1日起相继用“甲型H1N1流感”代替原来的“人感染猪流感”。世界卫生组织发言人说，之所以更改叫法，是因为“猪流感”一词容易误导消费者，美国和墨西哥等国的猪肉及猪肉制品已明显受到其他国家进口禁令影响。世界卫生组织的声明说，根据目前掌握的科学依据，此次流行的病毒仅在人际间传播，尚无证据表明它在猪群内传播，或由猪向人传播，也无证据表明人因食用猪肉或相关产品染病。病原学流行病学特点易感人群普遍易感。患者多数年龄在25岁至45