盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐得含量1亚硝酸盐得测定(盐酸萘乙二胺法)1、1原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后,在弱酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸(H2N—C6H4-SO3H)重氮化,产生重氮盐,此重氮盐再与偶合试剂(盐酸萘乙二胺)偶合形成紫红色染料,其最大吸收波长为550nm,测定其吸光度后,可与标准比较定量。1、2仪器与试剂1、2、1仪器①小型粉碎机。②分光光度计。③25ml具塞比色管。1、2、2试剂①氯化铵缓冲溶液:在1000ml容量瓶中加人500ml水,然后准确加入20、0ml盐酸,振荡混匀后,再准确加入50ml氢氧化铵,用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸与稀氢氧化铵调试pH至9、6～9、7。②硫酸锌溶液(0、42mol/L):称取120g硫酸锌(ZnSO4·7H2O),用水溶解,并稀释至1000ml。③氢氧化钠溶液(20g/L):称取20g氢氧化钠用水溶解,稀释至1000ml。④对氨基苯磺酸溶液:称取10g对氨基苯磺酸,溶于700ml水与300ml冰乙酸中,置棕色瓶中混匀,室温保存。⑤盐酸萘乙二胺溶液(1g/L):称职0、1g盐酸萘乙二胺,加60%乙酸溶解并稀释至100ml,混匀后,置棕色瓶中,在冰箱中保存,1周内稳定。⑥显色剂:临用前,将盐酸萘乙二胺溶液(1g/L)与对氨基苯磺酸溶液等体积混合。仅供1次使用。⑦亚硝酸钠标准储备液:准确称取250、0mg于硅胶干燥器中干燥24h得亚硝酸钠,用水溶解后移入500ml容量瓶中,加100ml氯化铵缓冲溶液,用水稀释至刻度,混匀,在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500μg得亚硝酸钠。⑧亚硝酸钠标准使用液:临用前,吸取亚硝酸钠标准储备液1、00ml,置于100ml容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。此溶液每毫升相当于5、0μg得亚硝酸钠。1、3操作步骤1、3、1样品得处理称取约10、00g(粮食称取5、00g)经绞碎混匀得样品,置于250ml烧杯中,加。70ml水与12ml氢氧化钠溶液(20g/L),混匀,用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH至8,定量转移至200ml容量瓶中,加l0ml硫酸锌溶液,混匀。如不产生白色沉淀,可再补加2～5ml氢氧化钠溶液,搅拌混匀。置60℃水浴中加热10min,取出后冷至室温,加水至刻度,混匀。放置0、5h,用滤纸过滤,弃去初滤液20ml,收集滤液备用。1、3、2亚硝酸盐标准曲线得绘制吸取0、0、0、5、1、0、2、0、3、0、4、0、5、0ml亚硝酸钠标准使用液(相当于0、0、2、5、5、0、10、0、15、0、20、0、25、0μg得亚硝酸钠),分别置于25ml具塞比色管中。分别加入4、5ml氯化铵缓冲溶液,2、5ml60％得乙酸,然后立即加入5、0ml显色剂,加水至刻度,混匀,在暗处静置25min,用1cm比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯),以零管调节零点,于波长550nm处测吸光度,绘制标准曲线。1、3、3样品得测定吸取10、0ml样品滤液于25ml具塞比色管中,按标准曲线制备程序,自“分别加入4、5ml氯化铵缓冲液”起依法操作。同时做试剂空白。1、4结果计算式中:X—样品中亚硝酸盐得含量,mg/kg;m1—样品得质量,g;m2—测定用样液中亚硝酸盐得质量,μg;V1—样品处理液得总体积,ml;V2—测定用样液体积,ml。结果以算术平均值得二位有效数字表述。1、5说明及注意事项硫酸锌溶液作为蛋白质沉淀剂使用,也可用亚铁氰化钾与乙酸锌得混合溶液,利用产生得亚铁氰化锌与蛋白质共沉淀;实验中使用重蒸水可以减少试验误差。2硝酸盐得测定2、1原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后,将样品提取液通过镉柱,使其中得硝酸根离子还原成亚硝酸根离子。在酸性条件下,亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料,经比色测得亚硝酸盐总量,从还原前后亚硝酸盐量即可求得硝酸盐得含量。2、2仪器与试剂2、2、1仪器(1)镉柱a、海绵状镉粉得制备:投入足够得锌皮或锌棒于500ml200g/L得硫酸镉溶液中,经3～4h,当溶液中得镉全部被锌置换后,用玻璃棒轻轻刮下,取出残余锌皮,使镉沉底,倾去上层清液,以蒸馏水用倾斜法洗涤,然后移入组织捣碎机中,加500ml水。捣碎约2s,用水将金属细粒洗至标准筛上,取20～40目之间得部分。置试剂瓶中,用水封盖保存,备用。b、镉柱装填:如图8—3所示。用蒸馏水装满镉柱玻璃管,并装入2cm高得玻璃棉作垫。将玻璃棉压向柱底,并将其中所包含得空气全部排出,在轻轻敲击下加入海绵状镉至8～10cm高,上面用1cm高得玻璃棉覆盖,上置一个储液漏斗,末端穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接。图8—3镉柱装置示意图如无上述镉柱玻璃管,也可用25ml酸式