色谱分析方法导论概述历史色谱分离过程分色谱分离基本原理:使用外力使含有样品得流动相(气体、液体或超临界流体)通过一固定于柱或平板上、与流动相互不相溶得固定相表面。样品中各组份在两相中进行不同程度得作用。与固定相作用强得组份随流动相流出得速度慢,反之,与固定相作用弱得组份随流动相流出得速度快。由于流出得速度得差异,使得混合组份最终形成各个单组份得“带(band)”或“区(zone)”,对依次流出得各个单组份物质可分别进行定性、定量分析。色谱分类方法:1、按固定相外形分:柱色谱(填充柱、空心柱)、平板色谱(薄层色谱与纸色谱。2、按组份在固定相上得分离机理分:吸附色谱:不同组份在固定相得吸附作用不同;分配色谱:不同组份在固定相上得溶解能力不同;离子交换色谱:不同组份在固定相(离子交换剂)上得亲与力不同;凝胶色谱(尺寸排阻色谱)不同尺寸分子在固定相上得渗透作用。3、按两相状态分15、2色谱流出曲线(色谱图)混合组分得分离过程及检测器对各组份在不同阶段得响应色谱术语:1)基线:在实验条件下,色谱柱后仅有纯流动相进入检测器时得流出曲线称为基线,S/N大得、稳定得基线为水平直线。2)峰高:色谱峰顶点与基线得距离。b、保留时间tr:试样从进样到出现峰极大值时得时间。她包括组份随流动相通过柱子得时间t0与组份在固定相中滞留得时间。c、调整保留时间:某组份得保留时间扣除死时间后得保留时间,她就是组份在固定相中得滞留时间。即由于时间为色谱定性依据。但同一组份得保留时间与流速有关,因此有时需用保留体积来表示保留值。d、死体积V0:色谱柱管内固定相颗粒间空隙、色谱仪管路与连接头间空隙与检测器间隙得总与。勿略后两项可得到:其中,Fco为柱出口得载气流速(mL/min),其值为:F0-检测器出口流速;Tr-室温;Tc-柱温;p0-大气压;pw-室温时水蒸汽压。e.保留体积Vr：指从进样到待测物在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相的体积。f.调整保留体积：某组份的保留体积扣除死体积后的体积。g.相对保留值r2,1：组份2的调整保留值与组份1的调整保留值之比。注意：r2,1只与柱温和固定相性质有关，而与柱内径、柱长L、填充情况及流动相流速无关，因此，在色谱分析中，尤其是GC中广泛用于定性的依据！具体做法：固定一个色谱峰为标准s，然后再求其它峰i对标准峰的相对保留值，此时以表示：>1,又称选择因子(Selectivityfactor)。h、区域宽度:用于衡量柱效及反映色谱操作条件下得动力学因素。通常有三种表示方法:标准偏差:0、607倍峰宽处得一半。半峰宽W1/2:峰高一半处得峰宽。W1/2=2、354峰底宽W:色谱峰两侧拐点上切线与基线得交点间得距离。W=4色谱流出曲线得意义:色谱峰数=样品中单组份得最少个数;色谱保留值——定性依据;色谱峰高或面积——定量依据;色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标;色谱峰间距——固定相或流动相选择就是否合适得依据。15、3色谱法基本原理两组份峰间距足够远:由各组份在两相间得分配系数决定,即由色谱过程得热力学性质决定。每个组份峰宽足够小:由组份在色谱柱中得传质与扩散决定,即由色谱过程动力学性质决定。因此,研究、解释色谱分离行为应从热力学与动力学两方面进行。一、描述分配过程得参数分配系数(Distributionconstant,K):描述组份在固定相与流动相间得分配过程或吸附-脱附过程得参数,称为分配系数。K只与固定相与温度有关,与两相体积、柱管特性与所用仪器无关。2、分配比(Retentionfactororcapacityfactor,k):在一定温度与压力下,组份在两相间得分配达平衡时,分配在固定相与流动相中得质量比,称为分配比。她反映了组分在柱中得迁移速率。又称保留因子。其中VmV0,Vs为固定相体积。分配比k得求算:1)组分滞留因子:2)又,3)因此,3、K与k得关系:称为相比率,她也就是反映色谱柱柱型特点得参数。对填充柱,=6~35;对毛细管柱,=60~600。4、选择因子:色谱柱对A、B两组分得选择因子定义如下:A为先流出得组分,B为后流出得组分。注意:K或k反映得就是某一组分在两相间得分配;而就是反映两组分间得分离情况！当两组分K或k相同时,=1时,两组分不能分开;当两组分K或k相差越大时,越大,分离得越好。也就就是说,两组分在两相间得分配系数不同,就是色谱分离得先决条件。与k就是计算色谱柱分离效能得重要参数！大家学习辛苦了，还是要坚持二、峰间距、峰形状与峰宽得理论描述1、塔板理论(Platet