中药色谱分析色谱联用技术API电离源LC/MS-WatersAllianceZMD系统Agilent1100SeriesLC/MSDVarian1200LLC/MS&LC/MS/MS1200LLC/MS/MSAnalyzer？？LC与MS联用面临的问题？？LC/MS联用的接口技术LC/MS：ESI结构图FinniganESIAgilentESIABESIWatersESIVarianESI=selectedm/z;与文献数据对比，明确鉴别目标化合物capillaryinletRH++MMH++RTheprimarystocksolutionsofcrudeextract(1mg/ml)andphenolicalkaloidsample(1mg/ml)werepreparedbydissolvingappropriateamountofsubstanceinmethanol.加钠离子（m/z830）2.LC-MSionization*直接液体导入接口(DirectLiquidIntroduction)27-35min，30-90%B；LargeunchargeddropletsNeutralLossScan:400~550→238~38819-27min，23-30%B；*避免使用难挥发性缓冲盐，可用醋酸铵、甲酸铵、三氟乙酸；Theprimarystocksolutionsofcrudeextract(1mg/ml)andphenolicalkaloidsample(1mg/ml)werepreparedbydissolvingappropriateamountofsubstanceinmethanol.Protonloss:M(M-H)-+H+LC-MSionizationLC-MSionizationLC-MSionizationLC-MSionization液滴分布状态进入四级杆质量分析器分析物离子化示例：稳定母离子的确认不同甲酸浓度下多西他赛母离子的稳定性与灵敏度考察不同甲酸浓度下多西他赛子离子的稳定性与灵敏度考察LC/MS：APCI结构图APCI:Nebulization&VaporizationIonizationintheAPCIChamberAPCI基本原理从液相色谱流出的样品溶液进入一具有雾化气套管的毛细管，经氮气流雾化，通过加热管时被气化。在加热管端进行电晕尖端放电．溶剂分子被电离，充当反应气，与样品气态分子碰撞，经过复杂的反应过程，样品分子生成准分子离子：R+eR+·+2eRH++MMH++RESIAPCI对象中等至强极性分子非极性/中等极性不适宜极端非极性样品热稳定性差/非挥发性流动相pH对离子化效率影响较大缓冲盐浓度低缓冲盐浓度可高些有机相比例不能太低水相比例可高些流速低流速较好高流速比ESI好LCLC/MS：*多数色谱柱与LC/MS匹配，离子交换柱除外*使用有机溶剂比例较高的系统*避免使用难挥发性缓冲盐，可用醋酸铵、甲酸铵、三氟乙酸；*使用挥发性离子对试剂：氢氧化四丁基铵（TBAH），七氟丁酸（HFBA）*流量匹配：兼顾色谱分离效果和ESI离子化效率；用1-2mm内径色谱柱，300-500ul/min；柱后分流ScanModes–FullScan全扫描ScanModes–SIM选择离子监测ScanModes–SRM选择反应监测ScanModes–MRM多反应监测ScanModes–PrecursorScan母离子扫描ScanModes–ProductScan子离子扫描ScanModes–NeutralLossScan中性丢失扫描多种扫描模式设定LC/MS在中药研究中的应用IdentificationofmultiplecomponentsinGuanxinninginjectionusinghydrophilicinteractionliquidchromatography/time-of-flightmassspectrometryandreversephaseliquidchromatography/time-of-flightmassspectrometryRapidCommunicationsinMassSpectrometryXiaofeiChen,ZiyangLou,HaiZhang,GuangguoTan,ZhiruiLiu,WuhongLi,ZhenyuZhuandYifengChai*研究背景研究背景因此，将注射液中绝大多数甚至全部成分搞清楚是，并进行针对性的质量控制，是保证中药注射液安全稳定的基础。莲子心中主要有效成分－双苄基异喹啉类生物碱的药用价值日趋重视。加钠离子（m/z830）2.SelectedIonM