第六章微生物的遗传变异与菌种选育本次课程内容一、自然界中分离的方法步骤（P148）从生产中选育：在生产过程中，微生物以一定频率发生自发突变。为选育优良的生产菌种创造了机会。定向培育优良品种：一般指用某一特定因素长期处理某微生物的群体（culturepopulation），同时不断地对它们进行移种传代，以达到积累并选择相应的自发突变株的目的。采用梯度平板法（gradientplate）：筛选抗代谢拮抗物的突变株，以提高相应代谢产物产量方面的工作，可认为是微生物定向培育技术的一大进展。例如，异烟肼是吡哆醇的代谢拮抗物（即结构类似物），筛选抗异烟肼的菌株，可得到吡哆醇的高产菌。例：定向培育抗异烟肼的吡哆醇高产突变株的方法二、诱变育种诱变育种的基本环节挑选优良的出发菌株（originalstrain）处理单孢子（或单细胞）悬液诱变育种工作中应考虑的几个原则选择诱变剂的种类：在选用理化因子作诱变剂时，在同样效果下，应选用最方便的因素；而在同样方便的情况下，则应选择最高效的因素。在物理诱变剂中，尤以紫外线为最方便，而在化学诱变剂中，一般可选用诱变效果最为显著的“超诱变剂”，如NTG(N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍)。采用简便有效的诱变方法：紫外线的照射最为方便。化学诱变剂的种类、浓度和处理方法尤其是中止反应的方法很多，实际工作时可参看有关书籍。一种较有效的简易处理方法的大致操作步骤是：先在平板上涂上出发菌株细胞，然后在平板上均匀地放上几颗很小的诱变剂颗粒（也可放吸有诱变剂溶液的滤纸片），经培养后，在制菌圈的边缘挑取若干突变菌落，分别制成悬浮液，然后将其涂在一般平板表面使长出许多单菌落，最后可用影印培养法或逐个检出法选出突变种。充分利用复合处理的协同效应（synergism）利用和创造形态、生理与产量间的相关指标选用最适剂量筛选方案筛选方法例：营养缺陷型突变株的筛选与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养基与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体营养缺陷型的筛选方法三、微生物的杂交育种四、原生质体融合育种（略）五、基因工程育种遗传物质在细胞内的存在部位和方式基因工程基因工程的基本操作获得目的基因的主要方法载体的选择目的基因与载体DNA的体外连接重组载体引入受体细胞基因工程的应用及发展前景第五节微生物菌种的保藏和复壮防止菌种衰退的方法菌种的复壮措施菌种的保藏菌种保藏的原理菌种保藏的方法干法保藏菌种的方法几种常用菌种保藏方法的比较作业：P174(23.25)一、自然界中分离的方法步骤（P148）从生产中选育：在生产过程中，微生物以一定频率发生自发突变。为选育优良的生产菌种创造了机会。定向培育优良品种：一般指用某一特定因素长期处理某微生物的群体（culturepopulation），同时不断地对它们进行移种传代，以达到积累并选择相应的自发突变株的目的。采用梯度平板法（gradientplate）：筛选抗代谢拮抗物的突变株，以提高相应代谢产物产量方面的工作，可认为是微生物定向培育技术的一大进展。例如，异烟肼是吡哆醇的代谢拮抗物（即结构类似物），筛选抗异烟肼的菌株，可得到吡哆醇的高产菌。诱变育种的基本环节选择诱变剂的种类：在选用理化因子作诱变剂时，在同样效果下，应选用最方便的因素；而在同样方便的情况下，则应选择最高效的因素。在物理诱变剂中，尤以紫外线为最方便，而在化学诱变剂中，一般可选用诱变效果最为显著的“超诱变剂”，如NTG(N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍)。采用简便有效的诱变方法：紫外线的照射最为方便。化学诱变剂的种类、浓度和处理方法尤其是中止反应的方法很多，实际工作时可参看有关书籍。一种较有效的简易处理方法的大致操作步骤是：先在平板上涂上出发菌株细胞，然后在平板上均匀地放上几颗很小的诱变剂颗粒（也可放吸有诱变剂溶液的滤纸片），经培养后，在制菌圈的边缘挑取若干突变菌落，分别制成悬浮液，然后将其涂在一般平板表面使长出许多单菌落，最后可用影印培养法或逐个检出法选出突变种。营养缺陷型的筛选方法重组载体引入受体细胞