过氧化氢酶测定.doc
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二.过氧化氢酶测定(容量法)(比较好测)1.试剂配制a.0.3%过氧化氢溶液:按1:100将30%H2O2用水稀释b.3N硫酸(???????????)c.0.1N高锰酸钾(1/5KMnO4)溶液:称取化学纯高锰酸钾3.161g,溶于1升无CO2蒸馏水中,贮于综色瓶中,备用。2.操作步骤(1)取2g风干土,置于100mL三角瓶中,并注入40mL蒸馏水和5mL0.3%H2O2溶液。(2)同时设置对照,即三角瓶中注入40mL蒸馏水和5mL0.3%过氧化氢溶液,而不加土样。(3)将三角瓶放在振荡机上振荡20min后,加入5mL3N硫酸,以稳定未分解的过氧化氢。再将瓶中悬液用慢速滤纸过滤。吸取25mL滤液,用0.1N高锰酸钾滴定至淡粉红色终点。3.结果计算用于滴定土壤滤液所消耗的高锰酸钾量(毫升数)为B,用于滴定25mL原始的过氧化氢混合液所消耗的高锰酸钾量(毫升数)为A。(A-B)×T即为过氧化氢酶活性。以20min后1g土壤的0.1N高锰酸钾的毫升数表示。(????)式中T为高锰酸钾滴定度的校正值。(就是最后换算成每克,所以还要测土壤含水量)高锰酸钾溶液标定称取0.2g(准至0.0001g)于105~110℃烘至恒重的基准草酸钠。溶于100mL(8+92)硫酸溶液中,用配制好的高锰酸钾溶液[c(KMnO4)=0.1mol/l]滴定,近终点时加热至65℃,继续滴定至溶液呈粉红色保持30s,同时作空白试验。高锰酸钾溶液标准浓度按下式计算c(1/5KMnO4)=m/(V1-V2)*0.06700式中c(1/5KMnO4)=—高锰酸钾标准液之物质的量浓度,mol/L;m——草酸钠之质量,g;V1——高锰酸钾溶液之用量,mL;V2——空白试验用高锰酸钾溶液之用量,mL;0.06700——与1.00mL高锰酸钾溶液c(1/5KMnO4)=1.000mol/l相当的以克表示的草酸钠的质量。