抗生素类药物分析第一节概述一、抗生素的定义及特点抗生素的分类三、抗生素类药物的细菌耐药性四、抗生素药物的质量分析㈡㈢灵敏度高、需用量少适用范围广－纯品、不纯品、已知的和新的可一次测定同类型抗生素的总效价－无需分离纯化与临床的应用要求一致操作繁琐、费时费力误差较大2、物理化学法HPLCLC-MSUV容量法准确可靠、专属性高、操作简单、省时、样品用量少第二节β-内酰胺类抗生素β-内酰胺类抗生素青霉素氨苄西林（氨苄青霉素）阿莫西林（羟氨苄青霉素）普鲁卡因青霉素头孢氨苄头孢羟氨苄㈡理化性质酸性与有机碱(普鲁卡因)成盐（四）β–内酰胺环的不稳定性青霉素类与含水量和纯度密切相关青霉素的降解产物二、鉴别反应2.茚三酮反应3.双缩脲反应4.与重氮苯磺酸反应1.K+、Na+的火焰反应2.沉淀反应（青霉素盐）3.重氮化-偶合反应光谱法2、色谱法1.头孢他啶聚合物的测定分子排阻色谱法固定相：葡聚糖凝胶G-10流动相A：3.5%硫酸铵的0.01mol/L磷酸盐缓冲液流动相B：0.01%十二烷基硫酸钠对照品溶液：头孢他啶对照品100µg/ml1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用1mg/ml蓝色葡聚糖2000、流动相A测定；重复性用对照品溶液、流动相B测定。N不低于900，拖尾因子0.75~1.5，峰面积的RSD应小于5.0%2）测定方法进样供试液，用流动相A；进样对照液，用流动相B。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过0.3%。2.头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查固定相：ODS流动相：0.2mol/L磷酸二氢铵-甲醇（62:38）1）头孢呋辛酯Δ2-异构体的制备：头孢呋辛酯对照品+流动相头孢呋辛酯Δ2-异构体。2）系统适用性试验：各异构体之间的R>1.5，以头孢呋辛酯A异构体计算n>1500。3）异构体：相对保留时间1--被测物2--标准物异构体相对保留时间判断B异构体0.85供试液谱图中A异构体的峰面积A异构体1.0与A、B异构体峰面积和之比应为0.48~0.55。3.头孢氨苄中有关物质的检查-反相TLC法固定相：活化后的硅胶G板置5%（V/V）正十四烷的正己烷溶液中，展至顶部，凉干展开剂：0.1mol/L枸橼酸-0.2mol/L磷酸氢二钠-丙酮（120：80：3）供试液：本品50mg/ml对照液（1）：本品0.5mg/ml对照液（2）：α-苯甘氨酸0.5mg/ml对照液（3）：7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸0.5mg/ml结果判断：供试液如显杂质斑点，与对照液（2）（3）位置相同上所的斑点比较，其颜色不得更深；如显其他杂质斑点，与对照液（1）所显的主斑点比较，其颜色不得更深。4.青霉素钠（钾）的吸收度检查：供试液1.80mg/ml，结果判断：A280不得大于0.10（一）高效液相色谱法原理：利用青霉素类抗生素在一定条件下在反相硅胶上的保留行为的不同而实现高效分离，并与标准品相对照，而对其进行定量的一种方法。优化色谱分析条件（1）Column-CNODSC18C8-Ben（2）mobilephase/flowrate（3）columntemperature（4）detectionwavelength（5）workstationsamplepreparation实验注意事项（1）色谱峰要达到较好的分离－基线分离(baseseparation)（2）需要标准品对照，用外标法定量（3）可同时测定多个组分的含量（4）需要排除制剂中辅料等杂质对测定的干扰（二）生物样本中β-内酰胺类抗生素的分析第三节氨基糖苷类抗生素链霉素链霉素：巴龙霉素庆大霉素绛红糖胺庆大霉素C复合物庆大霉素C1R=HR1、R2=CH3庆大霉素C2R=R2=HR1=CH3庆大霉素C1aR、R1、R2=H庆大霉素C2aR=CH3R1=R2=H庆大霉素C2bR=R1=HR2=CH3一、链霉素pH5～7.5庆大霉素pH2～12二、（2）Molisch反应具有五碳糖或六碳糖的氨基糖苷类抗生素经酸水解后，在盐酸作用下脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，加入α–萘酚（红紫色）或蒽酮（蓝紫色）红紫色（3）Elson-Morgan反应水解产生的N-甲基-L-葡萄糖胺在碱性溶液中与乙酰丙酮合成吡咯衍生物，再与对二甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液反应，生成樱桃红色缩合物。（4）麦芽酚反应－链霉素的特征反应链霉素水解得到的链霉糖经分子重排使环扩大形成六元环，然后消除N-甲基葡萄糖胺，再消除链霉胍，生成α-甲基-β-羟基-γ-吡喃酮（麦芽酚），该化合物与Fe3+在弱酸性溶液中形成红紫色配位化合物。紫红（5）坂口反应－链霉胍的特有反应向链霉素的水解产物链霉胍与NaBrO2反应得产物1；8-羟基喹啉也和NaBrO2反应得产物2。产