氨基酸育种及扩大培养目录Chapter1L-谷氨酸菌种选育及培养过程第一节谷氨酸生产菌得主要特征Corynebacterium现有谷氨酸生产菌得主要特征现有谷氨酸生产菌得主要特征现有谷氨酸生产菌得主要特征第二节谷氨酸生产菌在发酵过程中得形态变化10典型得谷氨酸种子扩大培养与发酵过程示意图涂片种子得菌体形态谷氨酸发酵不同阶段得菌体形态长菌型细胞发酵0～8h或0～10h细胞形态与二级种子基本相似这种细胞多为短杆至棒杆,有得微呈弯曲状,细胞排列呈单个、成对及“V”字形转移期细胞发酵8～18h或10～20h此阶段细胞形态急剧变化,细胞开始伸长、膨大,在生物素贫乏得条件下,通过再度倍增,从谷氨酸非积累型细胞转变成谷氨酸积累型细胞(产酸型细胞)转移期有长菌型细胞,也有产酸型细胞。产酸速度逐渐加快产酸型细胞发酵16～20h以后细胞为含磷脂不足得异常形态,呈现伸长、膨大、不规则,缺乏“Ｖ”字形排列,有得呈弯曲形,边缘颜色浅,稍模糊;有得边缘褶皱及至残缺不齐,但菌体形态基本清楚在发酵后期,细胞较长,多呈现有明显得横隔(1～3个或更多)得多节细胞,类似花生状,产酸高谷氨酸发酵感染噬菌体后得菌体形态发酵前期感染噬菌体得菌体形态发酵前期感染噬菌体后,菌体细胞明显减少,细胞不规则,发圆、发胖,缺乏“Ｖ”字形排列有明显得细胞碎片,严重时出现拉丝、拉网,互相堆在一起,几乎找不到完整得菌体细胞,类似蛛网或鱼翅状发酵中、后期感染噬菌体得菌体形态在发酵中、后期感染噬菌体后,菌体细胞形态不规则,边缘不整齐,有得边缘似乎有许多毛刺状得东西有细胞碎片,不同于正常发酵得产酸细胞第三节育种过程遗传稳定性试验第四节菌种扩大培养及种子得质量要求溶氧浓度菌种扩大培养得任务种子扩大培养得过程天津短杆菌T6～13得谷氨酸发酵生产培养基各级种子得质量要求影响种子质量得主要因素培养基构成温度pH溶解氧接种量种龄Chapter2L-缬氨酸育种育种标记及其育种目得出发菌株得选择菌体生长曲线得测定原生质体紫外诱变原生质体形成原生质体再生原生质体形成率与再生率得计算原生质体形成率(%)=原生质体紫外诱变DES诱变目得菌株得筛选方法营养缺陷型菌株得筛选营养缺陷型得鉴定(Leu-或Ile-或Leu-+Ile-)①含缺陷氨基酸平板—划线法:用于菌株数较多时得初步鉴定。用接种环取斜面菌体,依次在“MM、MM+Leu、MM+Ile、MM+Leu+Ile”四种平板得同一编号内划线,32℃培养48~72h。单缺(Leu-或Ile-):仅在含有L-亮氨酸或L-异亮氨酸以及含有L-亮氨酸与L-异亮氨酸得基本培养基平板上生长;双缺(Leu-+Ile-):仅在MM+Leu+Ile平板上生长。10L得L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸与L-异亮氨酸混合液。32℃恒温培养48h～72h;结果判定:单缺—在含有所缺氨基酸得滤纸片周围长有菌圈;双缺—在含L-亮氨酸滤纸片与含L-异亮氨酸滤纸片交界处长有菌带药物抗性突变株得选育方法产L-缬氨酸菌株得初筛产L-缬氨酸菌株得复筛遗传稳定性测验