菌种与种子扩大(kuòdà)培养菌种来源(láiyuán)分离思路新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用(cǎiyòng)各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。新种分离(fēnlí)与筛选的步骤采样(cǎiyànꞬ)2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。3、采土方式：在选好适当地点后，用小铲子(chǎnzi)除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。采好的样应及时处理，暂不能处理的也应贮存于4℃下，但贮存时间不宜过长。增殖(zēngzhí)培养纯种(chúnzhǒnꞬ)分离性能(xìngnéng)测定工业生产常用(chánꞬyònꞬ)菌种1细菌(xìjūn)(Bacteria)2放线菌(Actinomycetes)2放线菌(Actinomycetes)3单细胞真菌(zhēnjūn)----酵母(Yeast)4多细胞(xìbāo)真菌----霉菌(Molds)4多细胞真菌(zhēnjūn)----霉菌(Molds)一些(yīxiē)常用工业微生物氨基酸生产(shēngchǎn)菌的要求：食品工业(shípǐnɡōnɡyè)微生物诱变(yòubiàn)育种诱变剂诱变(yòubiàn)育种步骤紫外线的诱变(yòubiàn)育种操作步骤1．将细菌培养液以3000r／min离心(líxīn)5min，倾去上清液，将菌体打散加入无菌生理盐水再离心(líxīn)洗涤。2．将菌悬液放入一巳灭菌的，装有玻璃珠的三角瓶内用手摇动，以打散菌体。将菌液倒入有定性滤纸的漏斗内过滤，单细胞滤液装入试管内，一般处于浑浊态的细胞液含细胞数可达107-108个／ml左右，作为待处理菌悬液。3．取2～4m1制备的菌液加到直径9cm培养皿内，放入一无菌磁力搅拌子，然后置磁力搅拌器上、15W紫外线下30cm处。在正式照射前，应先开紫外线10min，让紫外灯预热，然后开启皿盖正式在搅拌下照射10～50s。操作均应在红灯下进行，或用黑纸包住，避免白炽光。4．取未照射的制备菌液和照射菌液各0.1ml进行稀释(xīshì)分离，计数活菌细胞数。5．取照射菌液2ml于液体培养基中(300ml三角瓶内装30ml培养液)，120r／min振荡培养4～6h。6．取中间培养液稀释(xīshì)分离、培养。7．挑取菌落进行检测。基因的直接进化(jìnhuà)育种能够利用廉价的原料，简单(jiǎndān)的培养基，大量高效地合成产物防止(fángzhǐ)菌种衰退工业(gōngyè)微生物菌种保藏技术冷冻保藏(bǎocáng)：-20℃以下冷冻，使微生物代谢活动停止分类：普通冷冻保藏(bǎocáng)(-20℃)超低温冷冻保藏(bǎocáng)(-60一-80℃)液氮冷冻保藏(bǎocáng)(-156℃)特点：简单有效培养物运输较困难在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般(yībān)方法是：1．离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞2．用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞；3．加入等体积的20％甘油或10％二甲亚砜；4．混匀后分装入冷冻指管或安瓿中，于-70℃超低温冰箱中保藏。超低温冰箱的冷冻速度一般(yībān)控制在1-2℃／min。一些细菌和真菌菌种可保藏5年而活力不受影响。冻干保藏：是通过在减压条件(tiáojiàn)下使冻结的细胞悬液中的水分升华，使培养物干燥。此法是微生物菌种长期保藏的最为有效的方法之一。特点：冻干状态下一般可保藏10年不丧失活力冻干后的菌株可常温保存，便于运输必须使用冷冻保护剂，常用脱脂乳、蔗糖等传代保藏：斜面培养(péiyǎng)基，平行传代，普通冰箱，三个月以下保存，供试验用矿物油保藏：将琼脂斜面或液体培养(péiyǎng)物浸入矿物油中于室温下保藏，简便有效，可用于丝状真菌、酵母、细菌和放线菌的保藏。特别用于难以冷冻干燥的丝状真菌和难以在固体培养(péiyǎng)基上形成孢子的担子菌载体保藏：麦壳，砂土灭菌后可用作载体几种常用菌种保藏方法(fāngfǎ)的比较种子：将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程(guòchéng)。这些纯种培养物称为种子。种子液质量的优劣对发酵生产起着关键性的作用。种子(zhǒngzi)扩培的目的二，种子制备的过程：实验室种子制备阶段：不用种子罐，所用(suǒyònɡ)的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此将其称为实验室阶段的种子