如凝集素亲和层析，免疫亲和层析和金属螯合亲和层析等。扩散：由高浓度向低浓度迁移的现象谓之扩散，扩散的速率可以用扩散系数来描述。Thesizesofthemoleculeslargerthantheporessizesofthebeadswillnotenterthebeadsandthuswashedfirst(elute).MW6000-1000000概念：在超速离心场作用下，蛋白质分子密度大于溶剂密度时，产生沉降，沉降速率与蛋白质分子大小、密度(包装)，溶液的密度、粘度有关。七、蛋白质分子的形状：利用摩擦比，即蛋白质在溶液内的摩擦系数f和理想化的非溶剂化的刚性球体的摩擦系数fG之比，可以描述蛋白质分子形状，f/fG>1.凝胶过滤：Othernamesincludegelfiltrationchromatographyormolecularsievechromatography.(4)2-Dgelelectrophoresis通常选择的洗脱液的极性与混合物中极性最大的组分相当。(2)SDS-PAGE:羟基磷灰石：为结晶磷酸钙，蛋白质中负电基团与吸附剂中钙结合，对双链DNA亲和力大，洗脱液往往是磷酸缓冲液，增加缓冲液浓度，可以把不同的蛋白组分分开，也可以用于单双链DNA的分离。粉末如淀粉、硅胶电泳；配体：把配体与琼脂糖凝胶共价连接，通常在配体和凝胶之间加一个e-氨基己酸，当蛋白质通过层析柱时，目标蛋白与配体结合被吸附，其它非特异性吸附的蛋白通过洗脱液洗去，再使用含相应的特异性配体的洗脱液洗脱目标蛋白。(2)SDS-PAGE:第五节蛋白质分离纯化方法三个效应：浓缩效应（浓缩胶）、分子筛效应、电荷效应。二、利用渗透压测定分子量利用半透膜进行测定p292三、蛋白质的扩散和扩散系数扩散：由高浓度向低浓度迁移的现象谓之扩散，扩散的速率可以用扩散系数来描述。1.扩散系数定义：当浓度梯度为一个单位时，在1s内，通过1cm2面积所扩散的溶质量。2.关系：D与蛋白质分子的大小、形状、溶剂的粘度有关。可以用来测定蛋白质分子量沉降系数：在单位离心场内，蛋白质的沉降速率是一个定值，谓之沉降系数，sedimentationcoefficient,expressedass.沉降系数单位s表示，蛋白质、核酸的沉降系数为1x10-13-200x10-13s范围把10-13谓之一个Svedbergunit,SHb为4.6x10-13，即4.6S，在20度下，溶剂为水时的S谓之标准的沉降系数，记为s2.沉降平衡法在一定的离心力作用下，蛋白质在离心管内形成浓度梯度，通过测定一定梯度内蛋白质的浓度，计算出分子量。式中c1，c2代表离旋转中心x1,x2的蛋白质浓度。其余同Svedberg方程。利用蛋白质分子对配体的特有结合能力，将目标蛋白从复杂的蛋白质混合物中分离出来。利用蛋白质分子对配体的特有结合能力，将目标蛋白从复杂的蛋白质混合物中分离出来。Fine,porousbeadscomposedofdextanpolymerssuchasSephadex,agarosesuchasSepharose,orpolyacrylamidesuchasSephacrylorBioGelP,arepackedintoachromatographycolumn.生物碱及某些酸类沉淀—单宁酸、苦味酸、三氯乙酸等，蛋白质在pH<pI时，带正电，与酸或生物碱的带负电基团作用。6S，在20度下，溶剂为水时的S谓之标准的沉降系数，记为s五、凝胶过滤法测定分子量Ifaparticularmoleculecanentertheporesofthebeads,itsdistributionisgivenbythedistributioncoefficient,KD:SDSissodiumdodecylsulfate,ithasahydropoobictailthatstronglyreactwithpolypeptidechains.6x10-13，即4.三个效应：浓缩效应（浓缩胶）、分子筛效应、电荷效应。利用一些吸附剂进行吸附，其主要作用力是范德华力和氢键，如使用羟基磷灰石，活性炭、氧化铝等。密度梯度离心：在一个离心管内，先使用梯度混合器形成蔗糖密度梯度，加入蛋白质，在离心时，一定分子量的蛋白质停留在特定的密度梯度内，可以分步收集。第一节蛋白质的酸碱性质三、细分离：使用凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析、亲和层析等，还可以采用各种电泳的方法进行分离。其余同Svedberg方程。在离心场中，受到三种力，即离心力，浮力和摩擦力。蛋白质显色：氨基黑，考马斯亮蓝等第三节蛋白质的胶体性质、蛋白质沉淀一、蛋白质的胶体性质