特点：利用样品与介质疏水性大小进行分离，样品不必脱盐。原理：1.疏水作用，Pr与疏水固定相结合。（1）Pr表面的疏水补丁。（2）Pr局部变性，暴露疏残基。（3）高盐浓度下1mol/L(NH4)2SO4,2mol/LNaCl,Pr表面疏水表面与固定相结合。原理：2.吸附剂：配体：苯基C6，辛基C8，烷基C18介质：硅胶、树脂如phenyl、sepharoseFF、sepharoseCL-4B吸附剂疏水层析吸附层析亲水性或疏水性基质颗粒状极性与非极性吸附剂固定相+疏水性基团（配体）洗脱剂由极性物：盐梯度流动相高盐→低盐非极性：有机溶剂极性大→小极性小→大洗脱物极性大→小极性小→大特点：基质结合配体密度大、疏水性强，对Pr类吸附性强，不容易洗脱下来,需加有机相(降低极性),使Pr易变性。