血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定一、血脂测定（二）血清总胆固醇测定胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素D3胆汁酸，并构成细胞膜成分，TC包括FC（1/3）和CE（2/3），胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实验室检测项目之一。TC测定方法很多，约200多种，分为化学测定法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法（决定性方法）。1、化学测定法主要有两类（1）Liberman-Burchard反应简称L-B反应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3.5-胆烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。（2）Zak反应胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3.5-胆烷二烯阳离子，然后在Fe3+存在下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度较L-B反应高7倍，且呈色稳定性好，但试剂腐蚀性极大，不能用于自动化分析。2、酶法胆固醇酯胆固醇＋脂肪酸胆固醇＋O2胆烷-4-烯-3酮＋H2O2H2O2＋4AAP＋酚红色亚胺醌＋H2O【参考范围】3.10～5.70mmol/L【临床意义】血清TC含量受年龄、性别、饮食和运动等因素的影响。①20岁以上随年龄↑而↑，70岁以后则有下降趋势。②20～40岁阶段男性高于女性，但女性绝经后则高于男性。③城市人群高于农村人群，与饮食和运动有关。④脑力劳动者高于体力劳动者。病理性高胆固醇血症原发性高胆固醇血症、糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲状腺功能减退。病理性低胆固醇血症严重贫血、甲亢、营养不良。（三）血清甘油三脂测定TG是有一分子甘油与三分子脂肪酸组成的化合物，主要存在于VLDL和CM中，临床化学中往往以测定甘油代表TG的含量。TG的测定方法很多，如气相色谱法、高效液相色谱法、红外分光光度法。但上述方法需特殊的仪器设备和技术，故一般只用于研究工作中。临床实验室主要用化学法和酶法。1、化学法基本步骤可归纳为四步（1）提取：甘油三脂的提取采用合适的溶剂，使脂蛋白变性提取TG，同时去除干扰物质(磷脂、游离甘油、葡萄糖等),常用方法有：1）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭土）吸附。2）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。3）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替正壬烷。应用较广。（2）皂化：甘油三脂的水解一般都采用KOH乙醇或KOH异丙醇溶液，60℃，5～15min可使TG完全水解。（3）氧化：甘油的氧化最常用的氧化剂是HIO4，甘油在酸性条件下被氧化成甲醛、甲酸。反应受α-磷酸甘油、葡萄糖、丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此类物质的干扰。（4）显色：显色测定甲醛。常用方法有：1）甲醛与变色酸（4.5-二羟-2.7-萘二磺酸）在硫酸溶液中加热生成紫红色化合物。（570nm）2）甲醛与乙酰丙酮在氨的存在下缩合成黄色的3.5-二乙酰-1.4-二氢-2.6-二甲基吡啶。（420nm）2、酶法常用的有：（1）磷酸甘油氧化酶法（GK-GPOD-POD法）TG＋H2O甘油＋FA甘油＋ATP3-磷酸甘油＋ADP3-磷酸甘油＋O2磷酸二羟丙酮＋H2O2H2O2＋4-AAP＋酚红色亚胺醌＋H2O试剂较稳定，灵敏度高，线性范围宽，胆红素、维生素C可消耗H2O2使结果偏低。（2）乳酸脱氢酶法（GK-PK-LDH法）TG＋H2O甘油＋FA甘油＋ATP3-磷酸甘油＋ADPADP＋磷酸烯醇式丙酮酸ATP＋丙酮酸丙酮酸＋NADH＋H+乳酸＋NAD+（3）甘油氧化酶法第一步消除血清中原有的甘油：游离甘油＋O2甘油醛＋H2O2【参考范围】0.56～1.70mmol/L【临床意义】血清TG一般随年龄增长而升高，体重超标者往往偏高。1.病理性增高原发性高脂蛋白血症、肥胖症、糖尿病、肾病综合症、脂肪肝、妊娠后期。2.病理性降低甲亢、肾上腺皮质功能减退、严重肝功能损伤。(四)血清（浆）脂蛋白测定1、血清脂蛋白电泳临床实验室常用的支持介质有醋酸纤维薄膜和琼脂糖凝胶。（1）血清脂蛋白醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持介质，血清脂蛋白经电泳分离，然后用臭氧氧化，使脂蛋白中的不饱和脂肪酸的双键断裂生成醛，再用亚硫酸品红染色，即生成紫红色区带。（2）血清脂蛋白预染琼脂糖电泳血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，进行电泳分离，即可得到清晰的兰色区带。凝胶浓度一般为0.5%，超过1%，β-Lp与preβ-Lp不易分开，＜0.5%，凝胶机械强度太低。血清：染料为9：1，染料过多稀释标本，而且染料中乙醇会引起蛋白质变性，影响分离效果。结果判断，直观区带的着色深浅，宽窄，用浅染，稍浅染，深染及消失加以描述；或用光密度扫描仪测定。【参考范围】α-Lp30%～40%preβ-Lp13