一、DNA的粗提取和鉴定1．DNA的粗提取原理(1)根据DNA的溶解性，DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。如图表示DNA在NaCl溶液中的溶解度随着NaCl溶液浓度变化而变化的曲线。(2)根据DNA，可用95%的冷酒精析出DNA。(3)根据DNA对的耐受性。2．DNA的提纯(1)方案一：利用DNA在不同的原理，通过控制NaCl溶液的浓度除去杂质。(2)方案二：直接在DNA滤液中加入，其中的能够分解蛋白质。(3)方案三：将DNA滤液放在的恒温水浴箱中保温10～15min。3．DNA的鉴定(1)所用试剂：。(2)处理方法：将试剂与DNA溶液混合后5min。(3)现象：溶液颜色变。二、多聚酶链式反应扩增DNA片段(1)PCR原理：。(2)PCR的反应过程：①变性：当温度上升到以上时，双链DNA解聚为。②复性：温度下降到50℃左右时，两种通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。③延伸：温度上升到左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸(A，T，C，G)在的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。④PCR反应的结果：DNA聚合酶只能特异地复制的DNA序列，使这段固定长度的序列呈扩增。三、血红蛋白的提取和分离实验1．凝胶色谱法的原理凝胶色谱法(也称分配色谱法)是根据将不同分子分离开来，即：的蛋白质容易进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度；而蛋白质不能进入凝胶内部，则移动速度，从而使相对分子质量不同的蛋白质得以分离。2．血红蛋白分离实验操作考点一[做一题][例1]回答下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的问题。(1)下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验原理的叙述正确的是()A．DNA在NaCl溶液中的溶解度，随NaCl溶液浓度的降低而减小B．利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNAC．DNA是大分子有机物，不溶于水而易溶于有机溶剂D．在沸水中，DNA遇二苯胺会出现紫色反应(2)由于鸡血较难找到，某学生试图用人血代替，结果没有成功，其原因最可能是()A．操作方法不对B．人血含DNA太少C．NaCl溶液浓度太高D．加二苯胺太少(3)下图为该实验过程中的一些重要操作示意图：①正确的操作顺序是________________________。②上图C、E步骤都加入蒸馏水，但其目的不同，分别是________________和________________。③上图A步骤中所用酒精必须是经过________才能使用，该步骤的目的是________。④为鉴定A中所得到的丝状物的主要成分为DNA，可滴加________试剂，沸水浴，如果出现________则该丝状物的主要成分为DNA。[解析](1)DNA在NaCl溶液中的溶解规律如右图所示。DNA不溶于酒精等有机溶剂，在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺后呈现蓝色。(2)由于人属于哺乳动物，成熟的红细胞中不含细胞核、线粒体，所以几乎不含DNA，很难提取到DNA。(3)DNA粗提取的过程为：红细胞加蒸馏水，涨破后过滤→用2mol/LNaCl溶解→过滤除去不溶杂质→加蒸馏水，析出含DNA的黏稠物→过滤→黏稠物溶解在2mol/LNaCl中→过滤→溶于95%酒精进一步提纯，所以根据图示及以上分析，正确操作顺序为C→B→E→D→A。[答案](1)B(2)B(3)①C→B→E→D→A②加速血细胞的破裂降低NaCl溶液的浓度，使DNA析出③充分预冷提取含杂质较少(或较纯净)的DNA(4)二苯胺(或甲基绿)蓝色(蓝绿色)[链一串]1．DNA粗提取与鉴定中不同试剂的用途及原理比较试剂2．实验步骤中2次加入蒸馏水的目的第一次加入是使鸡血细胞吸水涨破，第二次是稀释NaCl溶液至0.14mol/L，从而析出DNA。3．实验中4次过滤的比较[关键一点](1)鸡血经济且易制得，鸡血中的红细胞、白细胞都具有细胞核，含大量DNA。(2)甲基绿可将DNA染成绿色且不需水浴加热，二苯胺鉴定DNA属于颜色反应，需要沸水浴加热5min，可使DNA呈蓝色。(3)二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。[通一类]1．DNA粗提取的实验材料中有三次过滤：(1)过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液；(2)过滤含黏稠物的0.14mol/LNaCl溶液；(3)过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液。以上三次过滤分别为了获得()A．含核物质的滤液、纱布上的黏稠物、含DNA的滤液B．含核物质的滤液、滤液中DNA黏稠物、含DNA的滤液C．含核物质的滤液、滤液中DNA黏稠物、纱布上的DNAD．含较纯的DNA滤液、纱布上的黏稠物、含DNA的滤液解析：用