Introduction脂肪酶的生化特性脂肪酶的結構特性1CRL(A)Closed(inactive)form，黑色部分為胺基酸的位置62~92所形成的頂蓋(Liddomain)。(B)Open(active)form，黑色部分為胺基酸的位置62~92所形成的頂蓋(Liddomain)。Wecananalyze結晶結構發現脂肪中的頂蓋部位(liddomain)胺基酸序列差異頗大，因此以LIP4(19)/lid1，lid2，lid3與lid5分別轉型入P.pastoris系統，並將得到的脂肪進行酵素動力學以及活性測試，結果發現改變lid部位對脂肪的受質特異性以及活性都有顯著的影響。如在置換為lid2時，對triolein的活性可增至wildtype的5倍，而置換為lid5時，則為wildtype的2倍。但在lid1及lid3中則無明顯增加。同時在esterase活性中，只有lid2的活性提升，lid1，lid3及lid5的活性皆下降，由此證明lid部位對C.rugosa脂肪的功能，具有顯著的影響。有於Liddomain有hydrophobicmoment而又以LIP4最高，所以Lid在LIP的interfacialactivation過程扮演重要角色所以置換不同的Lid會呈現不同的物理性質，如蛋白質的表面的淨電荷和疏水性從模擬結構中可以看到活化能高低以及鄰近區的靜電力作用力，會決定該LIP的活化速率可以看到Lid以帶正電的Lys75與蛋白質表面帶負電的Asp292形成氫鍵及靜電力。此作用使Lid維持打開的狀態，進而穩定open的結構而Lid2上帶電荷殘基分布與Lid4相似。所以酵素動力學特性跟Lip4相近。以下置換Lid1、Lid3、Lid5由於帶電荷殘基的分佈情形與Lid4不同。可以看到Lys75與Asp292的靜電引力受到Glu71的干擾，因此呈現較差的催化的效率。以上的電腦分析的結果，發現了幾各與LIP活化過程相關的重要胺基酸。所以可以提供以後做site-directedmutagenesis的實驗，可以進ㄧ步了解LIP的結構與功能間的關係。