会计学分离纯化蛋白质的目的:①将蛋白质和非蛋白质杂质分离②将不同的蛋白质相互分离。分离提纯蛋白质的要求：（1）纯度（2）活性（3）得率（4）速度第一节能用作纯化依据的蛋白质性质1.2.3.4.5.7.9.11.13.15.第二节蛋白质分离纯化的一般步骤（一）前处理（二）粗分级分离（三）细分级分离第三节蛋白质的分离纯化方法一、根据分子大小不同的纯化方法1.透析和超滤透析是利用蛋白质等大分子不能通过半透膜的性质，使蛋白质和其它小分子物质如无机盐单糖等分开。常用的半透膜：玻璃纸（赛璐玢纸，cellophanepaper）火绵纸（赛璐玎纸,celloidinpaper）其他改型纤维素材料超滤（ultrafiltration）——除小分子杂质，分离、浓缩蛋白质/2.密度梯度离心法（densitygradient）密度梯度离心3.凝胶层析凝胶层析原理示意图//分子筛层析与洗脱曲线蛋白质Mr=49,000二、利用溶解度差别的纯化方法1.等电沉淀和pH控制2.蛋白质的盐溶和盐析3.有机溶剂分级分离4.温度对蛋白质溶解度的影响三、根据电荷不同的纯化方法1.电泳概述据电泳槽类型分聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是由丙烯酰胺（Acr）和甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂的作用下，聚合交联而成的。聚丙烯酰胺凝胶(PAG)具有三维网状结构，能起分子筛作用。用它作电泳支持物，对样品的分离取决于各组分所带电荷的多少及分子大小。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)还具有浓缩效应，即在电泳开始阶段，由于不连续pH梯度作用，将样品压缩成一条狭窄区带，从而提高了分离效果。加入分离胶溶液3.毛细管电泳毛细管电泳分离模式Waters的CapLC-ESI-Q-TofMicro™毛细管液相-串级质谱联用仪4.等电聚焦（isoelectricfocusing）5.聚焦层析Chromatofocusing）6.离子交换层析（ion-changechromatography）离子交换层析原理示意图梯度混合器常用的阳离子交换剂常用的阴离子交换剂四、利用选择性吸附的纯化方法1.羟磷灰石层析2.疏水作用层析五、利用配体的特异性亲和力的纯化方法亲和层析（affiuitychromatography）亲和层析原理示意图//