第31章DNA的重组.ppt
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HomologousrecombinationSite-specificrecombinationTransposition1.同源重组:一般性重组,最基本的重组方式两条同源DNA分子经过配对、断裂和再连接,而产生片段交换主要发生在减数分裂时期染色体交叉,四分体形成重点:Holiday中间体过程:断裂、交叉、分支移动、弯曲、旋转、切开2.位点特异性重组3.转座重组Homologousrecombination(同源重组)HomologousRecombination同源重组可产生异源双链和同源双链重组十分精确两DNA分子具有75bp以上的同源区并不要求完全同源重组与复制、重组修复密切相关需要多种酶的参与RecA蛋白:促进单链同化及SOS反应,最重要的重组蛋白RecA蛋白结合在单链上,与同源双链交换,置换出另一条单链RecBCD蛋白:产生参与重组的DNA单链RecBCD蛋白:三种酶活,移到chi位点时,切成具有游离3,端的单链,GCTGGTGGRuvA和RuvB促进异源双链的形成RuvC拆分Holiday中间体RecBCD-p特异识别GCTGGTGGT序列并在其下游4-6bp处切断S.S.DNADiploideukaryotes:crossingoverHollidayIntermediatestructureHaploidprokaryotesrecombination2.NicksmadenearChi(GCTGGTGG)sitesbyanuclease.3.RecA-ssDNAfilamentssearchtheoppositeDNAduplexforcorrespondingsequence(invasion).6.ResolvingHollidayjunctionRuvABisanasymmetriccomplexthatpromotesbranchmigrationofaHollidayjunction.RecombinationbasedDNArepairatreplicationforkRec.A-pHydrogenbondreformχ(chi)—sequence2.位点特异性重组重组发生在特异的重组位点上可以是分子内,也可以是分子间都是四条单链同一DNA分子同向:切除同一DNA分子反向:倒位不同DNA分子:整合Ig的基因重排Site-specificrecombination(位点专一重组)Site-DependentSpecificRecombinationattPofλSite-specificrecombination:Antibodydiversity3.转座重组转座因子:可以从染色体的一个位置移到另一个位置插入序列转座子非复制转座与复制转座都具有反向重复的序列Transposition(转座作用)Varioustransposons:InE.coli:ISelements/insertionsequence,1-2kb,compriseatransposasegeneflankedbyashortinvertedterminalrepeatsTntransposonseriescarrytranspositionelementsandb-lactamase(penicillinresistance)Eukaryotictransposons,manyareretrotransposons:YeastTyelementencodesproteinsimilartoRT(reversetranscriptase)SimplifiedTranspositionprocessTranspositionRecombination(replicationrecombination)