生物制药技术概念.ppt
上传人:天马****23 上传时间:2024-09-10 格式:PPT 页数:24 大小:1.6MB 金币:10 举报 版权申诉
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一、实验目的二、实验原理根据核糖核蛋白(RNP)与脱氧核糖核蛋白(DNA)在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离,然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白,使核酸释放出来,再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出,达到分离提纯的目的。三、实验材料三、实验材料四、实验步骤五、注意事项核酸含量测定实验原理:加热条件下:RNA+浓盐酸+地衣酚绿色(670nm处有最大吸收)DNA+酸+二苯胺蓝色(595nm处有最大吸收)试剂地衣酚(orcinol)试剂:称取100mg地衣酚溶于100ml浓盐酸中,再加入100mgFeCl3·6H2O二苯胺试剂:称取1g二苯胺(经重结晶)溶入100ml冰醋酸中,再加入2.75ml浓H2SO4摇匀。RNA标准液(200µg/ml)DNA标准液(400µg/ml)实验步骤:取三只试管,编号,加入如下图所示的试剂:一实验目的决定DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素:分离不同大小DNA片段应使用的琼脂糖凝胶浓度琼脂糖(%)分离DNA片段的有效范围(kb)0.51-300.70.8-121.00.5-101.20.4-71.50.2-3实验材料水平电泳槽及制胶模具琼脂糖电泳缓冲液6×凝胶载样缓冲液DNA样品DNAMarkerDNA染料溴化乙锭/Goldview紫外透射仪琼脂糖电泳缓冲液凝胶上样缓冲液(loadingbuffer)DNAMarker溴化乙锭四实验步骤1、稀释缓冲液的制备:用蒸馏水将5TBE缓冲液配制成0.5TBE稀释缓冲液.2、胶液的制备:称取0.4g琼脂糖,置于200ml三角烧瓶中,进入50ml的0.5TBE稀释缓冲液,放入微波炉或电炉加热至琼脂糖全部熔化,取出混匀。在冷却至50~600C的琼脂糖胶液中加入EB溶液至终浓度为0.5g/ml,混匀。小心地倒入电泳槽中至一定高度。待胶液完全凝固后拔出梳子。然后向槽内加0.5TBE稀释缓冲液至液面刚好没过胶板表面。3、上样:在DNA样品混匀6上样缓冲液,小心加到凝胶空中。同时加DNAMarker作为对照。4、电泳:从负极到正极,80-100V电泳40min。5、观察:在波长为254nm的紫外透射分析仪下观察DNA电泳带并估计其分子量大小。