生物制药的基本技术生物制药是把生物体内的具有生物活性的基本物质，保持原来的结构和功能，又能在含有多种物质的液相或固相中较高纯度的分离出来。它是一项严格、细致、复杂的工艺过程，涉及物理、化学、生物学、工程等方面的知识和操作技术。1.中心的问题：（1）、标准化方法？标准化包括制订标准和贯彻标准的全部过程（2）、如何发现或研制新药？对于一个新研制的生物药物，从查阅文献开始，到探索实验、条件考察（记录客观）、总结制定工艺规程、制定分析鉴定方法，再进行中试放大，全面考察工艺是否成熟，是否稳定等。1、提取法(Extraction)2、发酵法（Zymotechnics）3、化学合成（Chemicalsynthesize）4、组织培养法（Tissueculture）5、现代生物技术(ModernBiotechnics):Geneengineering,Enzymeengineering,Cellengineering,proteinEngineering,Fermentationengineering3.生化制药的六个阶段1.原料的选择和预处理2.原料的粉碎3.提取：从原料中经溶剂分离有效成分，制成粗品的工艺过程。4.纯化：粗制品经盐析、有机溶剂沉淀、吸附、层析、透析、超离心、膜分离、结晶等步骤进行精制的工艺过程。5.浓缩、干燥及保存6.制剂：原料药（精制品）经精细加工制成片剂、针剂、冻干剂、粉剂等供临床应用的各种剂型。一.RawMaterialSelectingandPretreatment原料选择和预处理、保存预处理方法：1、动物组织先要剔除结缔组织、脂肪组织等非活性部分；植物种子去壳除脂；微生物要进行菌体与发酵液分离等基本操作。便于贮存和运输。2、冷冻法预处理：有些材料要冷冻保存或低温保存，以便抑制微生物和酶的作用。3、有机溶剂除去部分水分：用丙酮或乙醇进行脱水和脱脂，有利于贮存。保存二、原料的粉碎ComminutionofRawMaterial1.机械法：组织捣碎机、匀浆器、研钵、球磨机、万能粉碎机、绞肉机、击碎机、刨片机。动物组织多在冰冻状态绞碎、溶浆。2.物理法A、反复冻融法：把待破碎的样品冷至-20℃-15℃，使之凝固，然后缓慢的溶解，如此反复操作，大部分动物性细胞及细胞内的颗粒可以破碎。B、冷热交替法：将材料投入沸水中，在90℃左右维持数分钟，立即置于冰浴中，使之迅速冷却，绝大部分细胞被破坏。此法多用于细菌或病毒中提取蛋白和核酸。C、超声波处理法：多用于微生物材料，处理的效果与样品浓度、使用频率有关。用大肠杆菌制备各种酶时，常用50~100mg/L菌体浓度，在1~10KC频率下处理10~15min。操作时注意避免溶液中气泡的存在。D、加压破碎法：加气压或水压，达0.59~34.32MPa(210~350kgf/cm2)的压力时，可使90%以上细胞被压碎。多用于微生物酶制剂的工业制备。3.生化及化学法：A.自溶法：将新鲜的生物材料存放在一定的pH和适当温度下，利用组织细胞中自身的酶系将细胞破坏，使细胞内含物释放出来的方法。自溶的温度，动物材料在0-4℃，微生物在室温下。自溶时，需加少量的防腐剂，甲苯、氯仿，以防止外界细菌的污染。*由于自溶时间较长，不易控制，故制造具有活性的核酸和蛋白质时比较少用。B.溶菌酶处理法：溶菌酶是专一地破坏细菌细胞壁的酶。多用于微生物，如蜗牛酶、纤维酶，植物细胞也适用。如用噬菌体感染大肠杆菌细胞制造DNA时，采用pH8.0的0.1mol/LTris-0.01mol/LEDTA制成2亿/ml的细胞悬液，然后加入100μg~1mg的溶菌酶，在37°C保温10min，细菌胞壁即被破坏。C.表面活性剂处理法：表面活性剂的分子中，兼有亲脂性和亲水性基团，能降低水的界面张力，具有乳化、分散、增溶作用。常用有：SDS、氯化十二烷基吡啶、去氧胆酸钠。三、提取Extraction3、温度：一般在5℃以下，但对温度耐受力较大的药物，可适当的提高温度，使杂蛋白变性分离，有利于提取和纯化。如胃蛋白酶、酵母醇脱氢酶及多肽激素类，选择37-50℃提取，效果较好。影响提取的因素：1、被提取物质溶解度的大小：一般极性对极性；非极性对非极性；酸对碱；碱对酸；高温；远离等电点。2、扩散作用的影响：扩散方程式G=DF*ΔC/ΔX*t3、分配作用的影响：分配定律(C1/C2)恒温、恒压=K分离机理萃取方法的适应性特点1.溶剂萃取一个良好的溶剂应满足的条件物质的溶解与相似相溶原理从能量变化的角度可将溶解过程分为三个过程：a.溶质的各质点的分离（吸收能量）b.溶剂A在溶质B的作用下，形成可溶纳B质点的空位。（吸收能量）c.溶质点B进入溶剂A形成的空位