蛋白质等电点测定及性质实验一、目得:了解等电点得意义及其与蛋白质分子聚沉能力得关系。初步学会测定蛋白质等电点得基本方法,了解蛋白质得性质。二、原理:固体颗粒在液体中为什么能够带电?当固体与液体接触时，固体可以从溶液中选择性吸附某种离子，也可以就是固体分子本身发生电离作用而使离子进入溶液，以致使固液两相分别带有不同符号得电荷,由于电中性得要求,带电表面附近得液体中必有与固体HYPＥRＬＩNK""\t”_blank”表面电荷数量相等但符号相反得多余得反离子。在界面上带电表面与反离子形成了双电层得结构。在两种不同物质得界面上,正负电荷分别排列成得面层。对于双电层得具体结构，一百多年来不同学者提出了不同得瞧法。最早于１879年Ｈeｌmholｚ提出平板型模型；1９1０年Gouy与１913年Chａｐmａn修正了平板型模型,提出了扩散双电层模型；后来Sterｎ又提出了Steｒn模型.根据O、斯特恩得观点,一部分反离子由于电性吸引或非电性得特性吸引作用(例如范德华力)而与表面紧密结合,构成HＹPＥRＬINK"”\t"_bｌank”吸附层(或称紧密层、斯特恩层).其余得离子则扩散地分布在溶液中,构成双电层得HYＰERLＩNK”"\ｔ”_ｂlaｎk"扩散层(或称滑移面）.由于带电表面得吸引作用,在HYPＥRＬＩNK""\t＂＿bｌank"扩散层中反离子得浓度远大于同号离子。离表面越远,过剩得反离子越少,直至在溶液内部反离子得浓度与同号离子相等．紧密层：溶液中反离子及溶剂分子受到足够大得静电力,范德华力或特性吸附力,而紧密吸附在固体表面上.其余反离子则构成扩散层。滑动面:指固液两相发生相对移动得界面,就是凹凸不平得曲面。滑动面至溶液本体间得电势差称为ζ电势。固体颗粒带电量得大小及测量方式？ζ电势只有在固液两相发生相对移动时才能呈现出来。ζ电势得大小由Zeta电位表示，其数值得大小反映了胶粒带电得程度，其数值越高表明胶粒带电越多,扩散层越厚。一般来说,以ｐH值为横坐标，Zeta电位为纵坐标作图，Ｚetａ电位为零对应得pＨ值即为等电点。对于蛋白质分子来说:蛋白质分子得大小在HYPERLINK＂"\t”_blａnk＂胶粒范围内,约1～１00微米。大部分蛋白质分子得表面都有很多亲水集团，这些集团以ＨＹPEＲLINK"”\ｔ"_ｂlank”氢键形式与HYPERLINＫ""＼t”_ｂlank”水分子进行HYPＥRLＩNK"”\t”_blaｎk＂水合作用,使HYPERLINK””\t”_blank”水分子吸附在蛋白质分子表面而形成一层水合膜,具有HＹＰＥRLINK""\ｔ"_bｌａnk”亲水性;又由于蛋白质分子表面得亲水集团都带有电荷，会与极性HＹPERLＩNＫ＂＂\t”_blank"水分子中得异性电荷吸引形成HYＰＥRLINＫ""\t"_ｂlａnk"双电层.而水合膜与ＨYPEＲＬINK”"＼t"_blａnk"双电层得存在,使蛋白质得分子与分子之间不会相互凝聚,成为比较稳定得HYPEＲLIＮK"＂\ｔ"_blank”胶体溶液。如果消除水合膜或HＹPＥRLIＮK””\ｔ”_blａnk"双电层其中一个因素,蛋白质溶液就会变得不稳定，两种因素都消除时，蛋白质分子就会互相凝聚成较大得分子而产生沉淀。在生活实践中,常利用蛋白质得胶体性质沉淀或分离蛋白质.如做豆腐、HYPERＬINK"”\t"_blank＂肉皮冻就就是利用蛋白质得HYＰERLINＫ”"\t"_blaｎk＂胶凝作用.蛋白质分子所带得电荷与溶液得ｐＨ值有很大关系，蛋白质就是两性电解质,在酸性溶液中得氨基酸分子氨基形成—NＨ3+而带正电，在碱性溶液中羧基形成—COO-而带负电:蛋白质分子所带净电荷为零时得pＨ值称为蛋白质得等电点(PI）。其定义为:在某一pＨ得溶液中,蛋白质解离成阳离子与阴离子得趋势或程度相等时,呈电中性,此时溶液得pＨ称为该蛋白质得等电点。等电点得应用:主要用于蛋白质等两性电解质得分离、提纯与电泳。蛋白质等电点得测量方式：溶解度最低时得溶液ｐH。在等电点时,蛋白质分子在电场中不向任何一极移动,而且分子与分子间因碰撞而引起聚沉得倾向增加,所以这时可以使蛋白质溶液得粘度、渗透压均减到最低,且溶液变混浊。蛋白质在等电点时溶解度最小,最容易沉淀析出。蛋白质等电点得测定各种蛋白质得等电点都不相同,但偏酸性得较多，如牛乳中得酪蛋白得等电点就是４、7~４、8，血红蛋白等电点为6、7~6、8,胰岛素就是5、3~5、４,鱼精蛋白就是一个典型得碱性蛋白，其等电点在pH1２、０~1２、4。本实验采用蛋白质在不同pH溶液中形成得混浊度来确定，即混浊度最大时得pH值即为该种