会计学胃癌与HER2检测结直肠癌与EGFR、KRAS检测胃肠间质瘤与C-KIT检测胃癌与HER2检测胃癌概述胃癌病理表现胃癌治疗HER：humanepidermalgrowthfactorreceptor，人类表皮生长因子受体HER2，又名c-erbB-2；原癌基因，位于17q21，编码跨膜糖蛋白，具有跨膜酪氨酸激酶活性；通过参与信号传道通路的一系列活动影响细胞的增殖与分化。信号传导至细胞核1=­基因拷贝数2=­mRNA转录3=­细胞表面受体蛋白表达4=­细胞外受体功能域释放HER2基因的致瘤机制：抑制凋亡，促进增殖；增加肿瘤细胞的侵袭力；促进肿瘤血管新生和淋巴管新生。研究表明：30％以上的人类肿瘤中存在HER2基因的扩增/过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等HER2在胃癌中表现关键步骤包括标本收集标本固定石蜡包埋切片和脱蜡概念：用标记的特异性抗体对组织切片标本中某种化学成分的分布和含量进行组织原位定性、定位或定量研究。基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织内抗原，对其进行定位、定性及定量的检测免疫组化步骤胃腺癌HER2检测可见不完全细胞膜染色IHC阴性(0)不染色或<10%的细胞膜染色FISH技术介绍样本预处理探针、样本变性探针＋样本杂交杂交后洗涤结果观察肠型FISH技术的特点结直肠癌与EGFR、KRAS检测定义：发生于结直肠粘膜上皮的恶性肿瘤流行病学：地域性：不同地区发病率有明显区别高发：北美、西欧、澳洲等；低发：日本、南美、非洲等年龄：国内以40~50岁为多，中位数为45左右，40岁以下者全部病例的1/3左右；高发国家大肠癌高发年龄为60~70岁好发部位：直肠、乙状结肠病理分型：同胃癌EGFR与KRASSchubbertSetal.,NatRevCancer2007;295-308SchubbertSetal.,NatRevCancer2007;295-308在结直肠癌中，K-ras基因突变率为35%-45%，已成为EGFR单克隆抗体治疗结直肠癌的主要疗效预测标志物。NCCN指南明确指出所有转移性结直肠癌患者都应检测K-ras基因状态。提高肿瘤临床治疗的针对性，降低治疗费用，节省宝贵的治疗时间。美国ASCO推荐把K-ras12、13号密码子突变检测作为结直肠癌患者接受EGFR单抗治疗的预测指标。K-RAS突变检测检测方法：PCR基本原理：利用PCR法扩增目的基因片段进行测序检测样本：肿瘤组织或其石蜡病理切片提取的DNAK-RAS突变检测胃肠间质瘤（GastrointestinalStromalTumor，GIST）GIST：发病机制GIST发病过程临床表现梭形细胞型病理学表现－免疫组化CD117GIST的病理诊断依据组织学表现符合典型GIST,CD117、DOG-1阴性病例检测基因突变的位点：6个C-kit基因第9、11、13和17号外显子PDGFRA基因第12和18号外显子由于大多数GIST（70%-85%）的基因突变发生在C-kit基因第11号外显子或第9号外显子，因此可优先检测这两个外显子。组织学表现符合典型GIST，CD117、DOG-1阴性，且无基因突变的病例的处理标本处理手术后标本的固定:所有的标本应该在离体后尽快的进行相应的保存和固定固定的意义：使蛋白质、核酸等大分子在原位凝固沉淀使细胞内各种酶灭活，防止细胞自溶保证免疫组织化学及分子学检测的可靠性和准确性所有的组织学标本建议用10%的中性福尔马林固定，应该避免使用酸性的福尔马林或是Bouin液固定免疫组化推荐Envision两步法：抗体CD117、DOG1：Dako抗原修复：1：400柠檬酸缓冲液（pH6.0）热修复对象对诊断疑难病例（组织学符合GIST，但CD117、DOG1阴性）推荐对所有高危性、转移复发性GISTs进行突变分析家族性GIST，儿童GIST，NF1（1型神经纤维瘤病）意义明确诊断指导治疗方法PCR扩增-直接测序基因检测应该在有资质的实验室进行应优先检测最常见的突变位点C-kit11、9、13、17；PDGFRA12、18C-kit基因突变：c-kit基因的靶向药物---伊马替尼（格列卫）c-kit基因突变与伊马替尼（格列卫）的疗效相关：存在11号外显子突变患者的疗效最好，存在9号外显子突变的患者疗效次之，而野生型GIST的疗效最差。PDGFRA基因突变：在无c-kit突变的GIST中28%~67%检出了PDGFRA突变，它与c-kit突变相互独立PDGFRA18号