酵母(jiàomǔ)双杂交系统主要(zhǔyào)从以下几方面介绍酵母双杂交系统酵母(jiàomǔ)双杂交系统的概念酵母(jiàomǔ)双杂交的原理双杂交系统的两个重要元件：转录激活因子：DNA结合结构域（DNAbindingdomain，简称为DB）和转录激活结构域（activationdomain，简称为AD）报道株：经改造的、含报道基因的重组质粒的宿主细胞。最常用(chánɡyònɡ)的是酵母细胞。酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点①易于转化、便于回收扩增质粒；②具有可直接进行选择的标记基因和特征性报道基因；③酵母的内源性蛋白不易同来源于哺乳动物的蛋白结合。酵母(jiàomǔ)双杂交模型模型(móxíng)文库筛选(shāixuǎn)的步骤序列(xùliè)分析质粒构建(Ɡòujiàn)实例：酿酒酵母的GAL4蛋白质N-端和C-端分别融合的两种蛋白质相互作用可激活具有UAS（upstreamactivatingsequence，上游激活序列）报告基因的表达i.GAL4蛋白质是一个调控基因，控制半乳糖利用酶类基因的表达，这些基因的5’-端存在UAS序列；ii.GAL4存在两个结构域：N-端(1-147)具有UAS-DNA结合域(DNA-bindingdomain,BD),C-端(768-881)具有转录激活结构域(transcriptionalactivationdomain,AD)。二个结构域不但可在其连接区适当部位打开，仍具有各自的功能(gōngnéng)，而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用。单独的DB虽然能和启动子结合，但是不能激活转录iii.如果AD和BD分别与两个基因(jīyīn)编码序列融合，且两种蛋白质能相互发生结合，就可导致GAL1-LacZ基因(jīyīn)的表达。其中与AD融合的基因(jīyīn)称之为钓饵基因(jīyīn)，与BD融合的基因(jīyīn)可称之为目的基因(jīyīn)(即建立的基因(jīyīn)文库)。为了提高报告基因(jīyīn)的表达活性，LacZ基因(jīyīn)还可以与HIS3基因(jīyīn)融合在一起，只有当HIS3基因(jīyīn)表达量足够大时，转化细胞才能在合成培养基上生长。2)操作步骤构建诱饵融合基因(jīyīn)（AD）转化相应的酵母菌株在检测平板上筛选构建文库（BD）阳性菌落提取质粒DNA，转化大肠杆菌阳性克隆的进一步鉴定/酵母双杂交系统的优点(yōudiǎn)与缺点酵母双杂交系统(xìtǒng)的应用3、利用酵母双杂交筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互作用的影响。例如：Dengue病毒能引起黄热病、肝炎等疾病，研究(yánjiū)发现它的病毒RNA复制与依赖于RNA的RNA聚合酶（NS5）与拓扑异构酶NS3，以及细胞核转运受体BETA-importin的相互作用有关。研究(yánjiū)人员通过酵母双杂交技术找到了这些蛋白之间相互作用的氨基酸序列。如果能找到相应的基因药物阻断这些蛋白之间的相互作用，就可以阻止RNA病毒的复制，从而达到治疗这种疾病的目的。4、利用酵母双杂交建立基因组蛋白连锁图（GenomeProteinLinkageMap）例如：HUA等人利用酵母双杂交技术，将所有已知基因和EST序列为诱饵，在表达文库中筛选与诱饵相互作用的蛋白，从而找到基因之间的联系，建立基因组蛋白连锁图。对于认识一些重要的生命活动：如信号传导、代谢途径等有重要意义。酵母双杂交系统(xìtǒng)方法的优化感谢您的观看(guānkàn)。内容(nèiróng)总结