沙门菌检验专题知识专业知识讲座.ppt
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沙门菌概况虽然沙门菌的血清型很多,但多数国家从人体、动物和食品中分离出沙门菌仅约40~50个血清型。而在一个国家中的一定时期只约有10个血清型是比较常见的。分类:伤寒沙门菌(伤寒、副伤寒)-传染病防治法中规定报告的乙类传染病。非伤寒沙门菌-食品卫生标准的检测的主要对象。沙门菌的生物学特性营养需求不高,需氧或兼性厌氧。普通营养培养基上均能生长,能够利用柠檬酸盐作为碳源。在普通肠道选择性平板上基本上形成无色菌落。菌落中等大小,半透明,表面光滑,边缘整齐或呈锯齿状。不分解乳糖,大部分菌株产H2S,发酵葡萄糖产酸不产气。最适培养温度为37℃,最适pH7.2~7.6。耐受胆盐,在粪便、土壤、食品、水中可生存5个月至二年之久。沙门菌的分布沙门氏菌检验程序目的:修复损伤的细菌细胞;方法:25g(mL)样品+225mLBPW的无菌均质杯中,以8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如使用均质袋,可直接进行培养。于36℃±1℃培养8h~18h。无菌均质袋轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于10mLTTB内,于42±1℃培养18~24h。同时,另取1mL,转种于10mLSC内,于36±1℃培养18~24h。分别用接种环取增菌液1环,划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板(或HE琼脂平板或显色培养基平板)。于36±1℃分别培养18~24h(XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板)或40h~48h(BS琼脂平板),观察各个平板上生长的菌落。为了最大可能的检出沙门氏菌,原则上必须使用两种以上选择性分离培养基。分离培养基回收率测定(%)典型菌落--BS典型菌落--HE典型菌落--XLD典型菌落--CHRO初筛微生物生化试验穿刺TSI方法接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基,也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36℃±1℃培养18h~24h,必要时可延长至48h。将已挑菌落的平板储存于2℃~5℃或室温至少保留24h,以备必要时复查。沙门氏菌属的三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验结果TSI的反应赖氨酸脱羧酶试验沙门氏菌属生化反应初步鉴别表沙门氏菌属生化反应初步鉴别表沙门氏菌属各生化群的鉴别必要时按此表进行沙门菌生化群鉴定沙门菌的增菌培养基沙门菌的增菌液沙门菌的分离培养基沙门菌的分离培养基沙门菌的分离培养基分离培养中的注意要点BS琼脂:某些非典型菌株产生绿色菌落,其周围培养基稍微或不呈暗色。如果BS平板培养24±2小时后,没有出现典型菌落,则不挑取任何菌落,让平板继续培养24±2小时。如果经48±2小时培养后,仍没有典型或可疑的菌落出现,则挑取2个或更多个非典型的菌落。沙门菌显色培养基可疑菌落的生化鉴定沙门菌在TSI琼脂上的反应赖氨酸脱羧酶试验靛基质试验尿素酶试验氰化钾试验沙门菌生化鉴定培养基-β-半乳糖苷酶(ONPG)试验沙门菌生化鉴定的主要试验项目沙门菌在API20E的典型反应VITEKGNI+沙门菌的血清学鉴定血清学鉴定时的注意要点:做血清凝集时,同时应用生理盐水做对照。O血清不凝集时,可将菌株转接于琼脂量较高(如2.5~3%)的斜面上,再做凝集。如果由于Vi抗原的存在而阻止了O抗原的凝集反应时,应挑取菌苔于1mL生理盐水中做成菌悬液。煮沸后再检查。(常见于伤寒沙门菌)。当二相沙门菌只检出一相H抗原时,可在琼脂斜面上移种1~2代后再检查,如仍只检出一相H抗原,可用位相变异的方法诱导另一相。