204SUZHOUUNIVERSITYJOURNALOFMEDICALSCIENCE2009；29(2)小鼠胚胎干细胞无饲养层培养及其生物学特性韩甫，叶荣，鲍柳君，张军超，张焕相（苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞生物学系，江苏省干细胞研究重点实验室，江苏苏州215123）摘要:目的建立小鼠胚胎干（ES）细胞株S8在无饲养层的条件下短期内连续传代体系，获得大量纯的ES细胞。方法ES-S8细胞无饲养层连续传代后，检测其未分化指标以及多分化潜能。结果ES-S8细胞在无饲养层条件下培养5代，AKP染色、SSEA-1免疫荧光、OCT-4均显阳性,以及经拟胚体（EB）途径自发分化后，能形成多种类型的细胞。结论ES-S8细胞能够在无饲养层条件下培养，至少传5代仍能保持未分化特异性指标和多分化潜能。关键词:胚胎干细胞；饲养层细胞；拟胚体；小鼠中图分类号：R329.2+8;Q813.1+1文献标识码：A文章编号：1673-0399（2009）02-0204-03CultureofMouseEmbryonicStemCellsandTheirBiologicalFeaturesWithoutFeederLayerCellsHANFu,YERong,BAOLiu-jun,ZHANGJun-chao,ZHANGHuan-xiang(DeptofCellBiology,SchoolofMedicineandLifeSciences,MedicalCollegeofSoochowUniversity，KeyLaboratoryofStemCellResearchofJiangsuProvince,JiangsuSuzhou215123，China)Abstract:ObjectiveToestablishthemethodofshort-termculturesofmouseembryonicstemcellsS8withoutfeederlayercellsandobtainrobustpureES-S8cells.MethodsES-S8cellswerecul-turedforfivepassageswithoutfeeders.Theundifferentiatedstatewasconfirmedbyexpressionofalka-linephosphatase,SSEA-1andOct-4,andthepluripotencyofEBsanalysed.ResultsES-S8cellswerepositiveforAKP,SSEA-1andOct-4withoutfeeders,anddifferentiatedintoavarietyofcelltypes.ConclusionES-S8cangrownormallyatleast5passageswithoutfeeders,andmaintaintheirundiffer-entiatedcharacteristicsandpluripotency.Keywords:embryonicstemcell;feederlayercells;embryoidbodies；mouse小鼠胚胎干细胞（embryonicstemcells，ESC）的较好黏附性的培养皿辅以0.1%明胶包被加强ES细研究对哺乳动物胚胎早期发育、疾病模型的建立以胞的黏附，对ES-S8细胞连续无饲养层培养，通过减及临床应用均具有重大意义。ESC培养主要采用胎少外源因素的干扰，为ES细胞定向分化及遗传操鼠成纤维（mouseembryonicfibroblast，MEF）细胞作作的研究提供实验依据。为饲养层细胞，它是一种常规的ESC培养方法[1]。该1材料与方法方法能够维持ESC的未分化状态及体外扩增和多主要材料和试剂分化潜能。但这种共培养的方式有时也暴露出不少1.1昆明小鼠清洁级由苏州大学实验动物中心提弊端：由于MEF经过丝裂霉素-C或X射线处理而，，供对性成熟雌鼠周龄注射血清促性素造成它们存活时间短，死亡的MEF细胞可能释放一。(8)（serum只后注射人绒些DNA片段或溶解酶进入培养液，干扰ESC的正gonadotrophin,PMSG,10IU／），48h毛膜促性腺激素常生长以及MEF本身一系列的遗传操作伴随外源（humanchorionicgonadotrop(h)in,只与成年雄鼠周龄以比例合异种基因和病毒，故目前各实验室均在探索建立一hCG,10IU／），(10)1∶1笼次日晨检查有阴道栓乳白色或淡黄色胶冻状种稳定的无饲养层培养ESC的方法[2]。本实验采用，，(基金项目：973项目资助（2005C