简单细胞生物学研究方法.doc
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1.细胞培养HYPERLINK"http://baike.baidu.com/view/3687.htm"\t"_blank"细胞培养细胞培养技术也叫细胞HYPERLINK"http://baike.baidu.com/view/6724.htm"\t"_blank"克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个HYPERLINK"http://baike.baidu.com/view/2689932.htm"\t"_blank"生物工程技术,还是其中之一的HYPERLINK"http://baike.baidu.com/view/381513.htm"\t"_blank"生物克隆技术来说,细胞培养都是一个必不可少的过程,细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养,既包括HYPERLINK"http://baike.baidu.com/view/3736.htm"\t"_blank"微生物细胞的培养,细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的HYPERLINK"http://baike.baidu.com/view/1859233.htm"\t"_blank"多细胞,这是克隆技术必不可少的环节,而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来,所以可以说细胞培养技术是HYPERLINK"http://baike.baidu.com/view/9476.htm"\t"_blank"生物技术中最核心、最基础的技术。2.细胞转染:DNA小片段插入体细胞或细胞系的过程。若此DNA未与宿主细胞DNA整合而获表达,称“瞬时转染(transienttransfection)”;若与宿主细胞DNA整合并随后者的复制而复制称“稳定转染(stabletransfection)”。3.cellInvasion入侵和cellmigration迁移4.流式细胞术flowcytometryassay;flowcytometry;FCM荧光激活细胞分选法(fluorescence-activatedcellsorting,FACS)一种细胞分选或分析技术。即以荧光素标记抗体结合相应细胞,用激光束激发单行流动的细胞,根据细胞所携带荧光(强度或类别)进行分选或分析。HYPERLINK"http://baike.baidu.com/view/158693.html"http://baike.baidu.com/view/158693.html5.MTT法3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide汉语化学名为3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。6.realtimepcr(Qpcr)实时定量PCR(real-timequantitativePCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量,并据此推断目的基因的初始量,不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法,已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。7.Westernblot:中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。8.HYPERLINK"http://baike.baidu.com/view/212184.htm"\t"_blank"酵母双杂交系统:由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立i。典型的真核生长转录因子,如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域:DNA结合结构域(DNA-bindingdomain)和转录激活结构域(transcription-activatingdomain)。前者可识别DNA上的特异序列,并使转录激活结构域定