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第三章细胞生物学的研究方法一、光学显微镜技术普通光学显微镜成像原理显微镜与显微技术决定光学显微镜得分辨率得要素(一)普通复式光学显微镜显微镜得种类及原理普通光学显微镜用浸没油取代空气得作用?Makingtissuesections、Howanembeddedtissueissectionedwithamicrotomeinpreparationforexaminationinthelightmicroscope、大家学习辛苦了,还是要坚持观察结果(二)荧光显微镜技术Theopticalsystemofamodernfluorescencemicroscope、Afiltersetconsistsoftwobarrierfilters(1and3)andadichroic(beam-splitting)mirror(2)、Inthisexamplethefiltersetfordetectionofthefluorescentmoleculefluoresceinisshown、Fluorescentdyes、Thestructuresoffluoresceinandtetramethylrhodamine,twodyesthataremonlyusedforfluorescencemicroscopy、Fluoresceinemitsgreenlight,whereastherhodaminedyeemitsredlight、荧光显微镜得应用荧光显微镜观察真菌得细胞核(三)激光共焦点扫描显微镜激光扫描共焦显微镜得原理图荧光显微镜(A)与激光扫描共焦显微镜(B)所观察图像得比较相差显微镜(phase-contrastmicroscope)一种将相位差转变成振幅差(明暗差)得显微镜,可观察不染色得活细胞。利用样品得不同位点得密度差,形成肉眼可见得明暗区别。微分干涉显微镜(differential-interferencemicroscope)一种将样品厚度上得微小区别转化成明暗区别相差显微镜。录像增差显微镜技术(video-enhancemicroscopy)相差显微镜观察真菌菌丝两种不同类型得光学显微镜所拍摄得图像比较二、电子显微镜二、电子显微镜技术电子显微镜得基本结构(A)与成像原理(B)电子显微镜与光学显微镜得区别超薄切片技术SpecimenPreparationforElectronMicroscopy电镜超薄切片样本制备示意图超薄切片技术显示得动物细胞超微结构家蚕细小病毒负染色电镜照片(病毒直径20nm)II、Scanningelectronmicroscope(SEM)Figure3-32、Cellsinculture、Scanningelectronmicrographofratfibroblastsgrowingontheplasticsurfaceofatissue-culturedish、扫描电镜原理示意图(A),扫描电镜下可清晰地显示原生动物四膜虫表面得纤毛与口器(B)三、隧道扫描显微镜几种显微镜可观察得样品大小(箭头之间得范围)及其分辨能力(右侧箭头所指位置)第二节细胞及其组分得分析方法一、用超离心技术分离细胞组分用密度梯度离心分离细胞组分示意图二、细胞成分得细胞化学显示方法A:直接免疫荧光标记技术:利用偶联荧光分子得抗体与细胞或细胞切片进行孵育,使抗体与相应抗原结合,在荧光显微镜下对抗原进行定位得技术。B:间接免疫荧光标记技术:即不带荧光标记得第一抗体与相应抗原孵育形成复合物后,再用荧光标记得第二抗体识别第一抗体,从而显示抗原所在位置。免疫胶体金电镜原位杂交技术得基本原理与应用(膀胱上皮细胞膜蛋白得分布:箭头所指)四、细胞内特异核酸得定位与定性用原位杂交技术显示Z13基因在受精后1d得斑马鱼胚胎得体节、眼与松果体中得表达(箭头所指)五、定量细胞化学分析与细胞分选技术流式细胞仪得工作原理第三节细胞培养与细胞工程一、细胞培养动物细胞培养二、细胞工程单克隆抗体制备过程应用显微注射技术进行细胞核移植第四节细胞及生物大分子得动态变化一、荧光漂白恢复技术荧光漂白恢复技术原理示意图二、酵母双杂交技术三、其她技术第五节模式生物与功能基因组得研究一、细胞生物学研究常用得模式生物