细菌性灭活疫苗制造细菌性活疫苗制造病毒性动物组织疫苗制造病毒性禽胚培养疫苗制造细菌性灭活疫苗制造注意事项:动物选择种毒常用的接种途径观察与收获制苗适应于鸡胚的种毒包括自然弱毒与人工培育的弱毒两类。多为冻干毒。冻干毒种需按规定要求在鸡胚继代复壮，通常继代3代以上，经检定符合标准后方可作为生产疫苗的毒种,包括无菌检测、毒价和其他项目的检定等。受精卵必须来自SPF鸡群,从受精卵入孵开始至培育全过程都应保持无菌，要求一定的温度和湿度，且需不断翻动。5～8日龄胚适用于卵黄囊接种：9－11日龄胚用于尿囊腔接种；10～12日龄胚适于羊膜腔接种；11～13日龄胚用于绒毛尿囊膜接种。（SPF：无特定病原菌）尿囊腔：流感病毒卵黄囊接种：乙型脑膜炎病毒绒毛尿囊膜：疱疹病毒。羊膜腔接种：流行性感冒病毒、流行性腮腺炎病毒鸡胚培养法病毒接种途径2、卵黄囊接种法（1）取6～8天鸡胚，检卵灯下画出胎位和气室，垂直放于蛋架上，气室端向上。碘酒消毒气室中央，刀尖锥一小孔。（2）以1ml注射器及12号针头吸取乙型脑炎病毒液0.5ml，自小孔穿入垂直接种于卵黄囊内，深度为3cm左右，注入标本0.2ml～0.5m1，退出注射器。胶纸封口，37℃孵育。每天检卵并翻动2次。（3）取孵育24h以上濒死的鸡胚，于气室端开口，用镊子提起卵黄蒂，挤去卵黄液，用无菌生理盐水洗去卵黄囊上的卵黄液后将卵黄囊置于无菌平皿内，低温保存备用。3、绒毛尿囊膜接种法（1）取12天龄鸡胚，检卵灯下标记胎位，于附近无大血管处碘酒消毒。用小锯片在其鸡胚旁无大血管处的卵壳上锯一四方形（勿伤壳膜），同时于气室用刀尖锥一小孔。（2）打开四边形之卵壳，勿伤及卵壳膜，滴加灭菌生理盐水一滴于壳膜上。用橡皮乳头从气室小孔吸气，可见盐水被吸下，绒毛膜下沉，形成人工气室。（3）用注射器吸取0.2ml～0.5ml单纯疱疹病毒液滴于绒毛尿囊膜上，胶纸封口。37℃孵育4～5天后收获。（4）收获：剪开气室，如接种效果成功，绒毛尿囊膜上可见明显疹斑。用无菌剪刀剪下此膜，置于无菌平皿内低温保存，备用。4、羊膜腔接种法（1）取12天鸡胚，经照视后划出气室，并标明胚胎位置。（2）在气室端开方形天窗，紧捏无菌镊子，选无大血管处，快速穿刺绒毛尿囊膜，镊子头进入尿囊后，再夹起羊膜，轻轻将其自绒毛尿囊膜破裂处拉出，以1ml注射器穿破羊膜，注入病毒液0.1ml～0.2ml。（3）用镊子将羊膜轻轻送回原位，用玻璃胶纸封闭气室端天窗，置孵箱37℃孵育。（4）培养3～5天后，即可收获，经消毒人工气室，剪去壳膜及绒毛尿囊膜，吸弃尿囊液，夹起羊膜，用细头毛细吸管穿入羊膜吸取羊水于小瓶中冷藏。鸡胚接种途径主要有尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种和绒毛尿囊膜接种4种。鸡胚接毒后培养增殖的时间、温度、湿度，以及收获的标准与内容物依不同的病毒和不同疫苗而异。经无菌检验合格后即可进行配苗。湿苗：通常于鸡胚液内按每毫升加入青、链霉素500～1000ul，放置0～10℃冷暗处处理后分装。冻干苗：按比例加入保护剂，充分混合后过滤，在滤液内按每毫升加入青、链霉索500～1000ul，混匀后分装冻干。强毒种的选育弱毒种的选育